人血管内皮生长因子(VEGF)elisa试剂盒

                                             人血管内皮生长因子(VEGF)elisa试剂盒
1. 检测原理（双抗体夹心ELISA）

预包被捕获抗体：微孔板包被抗人VEGF单克隆抗体。

样本结合：VEGF蛋白与捕获抗体特异性结合。

检测抗体孵育：加入生物素或HRP标记的抗VEGF二抗，形成“抗体-抗原-抗体”复合物。

信号放大与显色：链霉亲和素-HRP催化TMB显色（蓝色→黄色，终止后）。

定量分析：450nm测OD值，VEGF浓度与吸光度成正比。

 2. 试剂盒组成

组分  说明

预包被微孔板  96孔（可拆卸），包被抗VEGF单抗（如抗VEGF-A亚型）。

VEGF标准品  重组人VEGF蛋白（0、31.25、62.5、125、250、500、1000 pg/mL）。

检测抗体  生物素或HRP标记的抗VEGF二抗（识别不同表位）。

TMB显色液  避光保存，现用现配。

终止液  1M H?SO?。

洗涤缓冲液  20×浓缩PBS-Tween 20，需稀释使用。

样本稀释液  含蛋白稳定剂，减少基质效应。

3. 适用样本及处理

血清/血浆（EDTA/肝素抗凝）：离心（1000×g, 10min）去除纤维蛋白。

细胞上清：离心（300×g, 5min）去除细胞碎片。

组织匀浆：裂解后离心（12000×g, 15min）取上清。

稳定性：2-8℃保存≤24小时，长期需-80℃（避免反复冻融）。

4. 操作步骤（简化版）

加样：标准品/样本加入微孔板 → 37℃孵育2小时。

洗涤：洗板3次，去除未结合物。

加检测抗体：孵育1小时（37℃）。

信号放大（若适用）：加链霉亲和素-HRP，孵育30分钟。

显色：加TMB → 避光反应15分钟。

终止与检测：加终止液，450nm读值（参考630nm）。

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5. 关键性能参数

参数  指标

检测范围  15.6–1000 pg/mL（可稀释扩展）

灵敏度  <5 pg/mL

精密度  板内CV <8%，板间CV <12%

特异性  检测VEGF-A（165aa亚型），不结合PlGF或PDGF。

回收率  90–110%（血清/细胞上清验证）