人表皮生长因子(EGF)elisa试剂盒

1. 检测原理

双抗体夹心ELISA（最常用）：

捕获抗体：预包被在微孔板上，特异性结合样本中的EGF。

检测抗体：生物素或酶标抗体（如HRP标记）与EGF结合，形成“抗体-抗原-抗体”复合物。

信号放大（若使用生物素系统）：加入链霉亲和素-HRP，增强检测灵敏度。

显色反应：TMB底物显色（蓝色→黄色），OD值与EGF浓度成正比。

 2. 主要组分

组分  说明

预包被微孔板  96孔或48孔，包被抗EGF抗体

EGF标准品  重组人EGF（0-1000 pg/mL或更高）

检测抗体  生物素/HRP标记的抗EGF抗体

链霉亲和素-HRP（如适用）  用于生物素系统信号放大

显色底物（TMB）  催化显色，终止后黄色

终止液（H?SO?）  终止反应

洗涤缓冲液（PBS-T）  含吐温-20，去除未结合物

样本稀释液  减少基质干扰

3. 适用样本类型

体液：血清、血浆（EDTA/肝素抗凝）、唾液、尿液（需浓缩）。

细胞培养上清：肿瘤细胞或干细胞分泌的EGF。

组织匀浆：皮肤、肿瘤组织等（需裂解离心）。

样本处理建议：

避免反复冻融（分装保存于-80℃）。

高蛋白样本（如血清）可能需稀释后检测。

4. 操作步骤（简化版）

加样：标准品/样本加入微孔板，孵育（37℃, 1-2小时）。

洗涤：洗去未结合蛋白。

加检测抗体（生物素或HRP标记），孵育。

加链霉亲和素-HRP（若为生物素系统）。

显色（TMB, 避光15-30分钟）。

终止，测450 nm OD值（参考630 nm）。

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