人趋化因子CCL5(CCL5)elisa试剂盒

一、基本原理

双抗体夹心ELISA技术

捕获抗体：微孔板预包被抗CCL5单克隆抗体，特异性结合样本中的CCL5。

检测抗体：加入生物素或酶标记的二抗（如HRP标记），形成“抗体-CCL5-酶标抗体”复合物。

信号检测：通过TMB等底物显色，OD值与CCL5浓度成正比，酶标仪定量分析（检测波长450nm，参考波长630nm）。

二、主要组成

 核心组分

预包被CCL5抗体的96孔微孔板

CCL5标准品（梯度浓度，如0、15.6、31.2、62.5、125、250、500、1000 pg/mL）

酶标二抗（HRP或AP标记）、洗涤缓冲液（10×浓缩液）

显色底物（TMB）、终止液（1M硫酸）

辅助材料

样本稀释液、封板膜、质控品（高/低值）

三、适用样本与检测范围

样本类型

血清/血浆（EDTA或肝素抗凝，避免反复冻融）。

细胞培养上清（需离心去除碎片）。

组织匀浆液（需明确提取方法）。

检测范围与灵敏度

典型范围：15.6–1000 pg/mL（高灵敏度试剂盒可检测至5 pg/mL）。

回收率：通常要求85–115%（验证样本稀释线性）。

五、操作流程（简化版）

加样孵育：标准品/样本加入微孔，37℃孵育1–2小时。

洗涤：自动或手动洗板3–5次。

加酶标抗体：37℃孵育30–60分钟。

显色与终止：TMB反应10–15分钟，终止后30分钟内检测。

数据分析：四参数拟合标准曲线，计算样本浓度。

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四、临床应用与研究价值

炎症与自身免疫疾病

类风湿关节炎（RA）：滑液中CCL5升高与关节损伤相关。

动脉粥样硬化：血管内皮细胞释放CCL5促进单核细胞浸润。

感染与免疫调控

HIV感染：CCL5竞争性结合CCR5受体，影响病毒入侵。

慢性肝炎：肝纤维化进程中CCL5水平异常。

肿瘤微环境研究

某些癌症（如乳腺癌、肺癌）中CCL5高表达与转移相关。