SK-NEP-1人肾母细胞瘤细胞

SK-NEP-1人肾母细胞瘤细胞

  细胞特性:

超微结构有少许微绒毛，连接复合物，形态完整的高尔基体，内质网多为光滑型，脂滴，没有病毒棵粒。

1） 来源：肿瘤组织

2） 形态：上皮细胞样，悬浮成团生长

3） 含量：>1x10^6  细胞数

4） 规格：T25瓶或者1mL冻存管包装

5） 用途：仅供科研使用。

细胞背景与临床意义

（1）基础特征

来源：源自儿童肾母细胞瘤（Wilms瘤）患者的腹水，属 胚胎性肿瘤（三阶段分化潜能）

分子标签：

WT1基因缺失（11p13区域，肾母细胞瘤标志性变异）

TP53野生型（区别于高危亚型）

低表达MYCN（与神经母细胞瘤鉴别）

形态特性：悬浮生长为主，偶见贴壁细胞（具干细胞样特性）

（2）研究价值

核心应用： ? 儿童肾母细胞瘤发病机制研究（如WT1-β-catenin通路）

? 化疗敏感性测试（对放线菌素D敏感，IC50≈0.1nM）

独特优势： ? 保留间充质-上皮转化（MET）潜能，适合发育生物学研究

核心研究方向与实验设计

（1）靶向治疗开发

WNT/β-catenin通路：

1. XAV939（WNT抑制剂，5μM）处理48h  

2. 检测核内β-catenin（免疫荧光）及凋亡率（Annexin V/PI）  

分化诱导： 全反式维甲酸（ATRA 10μM）诱导上皮分化（E-cadherin表达上调）

（2）动物模型

原位移植：

1. 裸鼠肾包膜下注射（2×10^6 cells/10μL Matrigel）  

2. 高频超声监测肿瘤体积（每周1次，频率40MHz）  

培养操作规范

（1）培养体系

培养基：RPMI-1640 + 15% FBS + 1% NEAA + 0.1% β-巯基乙醇

特殊处理：

悬浮细胞需离心（200g×5min）传代

贴壁亚群需胶原Ⅳ包被培养皿

冻存复苏：

冻存液：90% FBS + 10% DMSO

复苏后静置48小时再实验（减少应激损伤）

 注意事项：

污染防控：细菌污染：培养液浑浊、变黄，需添加抗生素（如青霉素-链霉素），污染严重时丢弃。

霉菌污染：显微镜下可见丝状/絮状漂浮物，需彻底消毒培养箱（过氧乙酸擦拭+紫外线照射），污染细胞立即丢弃。

支原体污染：无明显外观变化，需定期用PCR或荧光法检测，污染后可用支原体清除试剂处理。

操作规范：收到细胞后，先检查包装完整性及干冰状态，镜检细胞形态并拍照记录（40x、100x、200x）。

未开封细胞若污染或活性差（3天内反馈），可申请重发；客户操作失误导致问题不重发。

运输与保存：干冰运输：冻存管含1×10⁶ cells，收到后立即转入液氮或-80℃冰箱。

常温运输：T25培养瓶，收到后静置3-4小时稳定状态，再换液或传代。

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