SK-MEL-2+LUC人皮肤黑色素瘤细胞荧光素酶标记 新品

细胞属性

1） 来源：黑色素瘤

2） 形态：多角，贴壁生长

3） 含量：>1x10^6  细胞数

4） 规格：T25瓶或者1mL冻存管包装

5)  用途：仅供科研使用。

1. 细胞模型与标记背景

（1）基础特性

亲本细胞：SK-MEL-2（ATCC HTB-68）源自皮肤转移性黑色素瘤，属 BRAF野生型/NRAS突变型（Q61R）模型

标记方法：

稳定转染 萤火虫荧光素酶（Firefly Luciferase） 基因（常用载体：pGL4.51[luc2/CMV/Neo]）

筛选标志：新霉素（G418，常用浓度400-800 μg/mL）

（2）核心优势

活体成像：可动态监测肿瘤生长/转移（灵敏度达100-1000个细胞）

高通量筛选：适用于抗肿瘤药物体外疗效评估（IC50检测）

2. 实验应用方案

（1）体内外检测体系

应用场景 检测方法 关键参数

皮下成瘤模型 活体成像（IVIS系统） D-荧光素150 mg/kg，注射后10分钟

转移模型（肺/肝） 离体器官成像 曝光时间30-60秒（F/stop=1）

体外药物筛选 微孔板发光检测（酶标仪） 底物浓度150 μg/mL，积分时间1秒

（2）标记验证实验

1. **荧光素酶活性检测**：

   - 裂解细胞后加入D-荧光素（1mM）  

   - 化学发光读数（RLU值＞1×10^6/μg蛋白为合格）  

2. **稳定性验证**：  

   - 连续传代10次后检测发光强度衰减（应＜20%）

3. 培养与质控标准

（1）培养体系

培养基：MEM + 10% FBS + 1% NEAA + G418（维持浓度200 μg/mL）

传代要点：

0.25%胰酶消化2分钟（避免过度消化导致标记丢失）

接种密度≥5×10^4 cells/cm2（低密度影响发光稳定性）

（2）质控要求

必须检测：

每月STR鉴定（匹配ATCC HTB-68标准）

支原体检测（建议MycoAlert? PLUS）

功能验证：

裸鼠皮下接种（5×10^5 cells/只）验证成瘤性与发光信号线性关系

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