MDA-MB-231+LUC人乳腺癌细胞荧光素酶标记

MDA-MB-231+LUC人乳腺癌细胞荧光素酶标记

细胞特性:

该细胞通过慢病毒转染的方式携带Luc基因。

1） 来源：乳腺癌

2） 形态：上皮细胞样 贴壁生长

3） 含量：>1x10^6  细胞数

4） 规格：T25瓶或者1mL冻存管包装

5)  用途：仅供科研使用。

1. 细胞系特点

亲本细胞：MDA-MB-231（高转移性三阴性乳腺癌细胞，TNBC）。

标记基因：萤火虫荧光素酶（Firefly Luciferase），在ATP和O存在下催化D-荧光素（D-Luciferin） 发光。

应用：

体内成瘤实验（皮下/原位/转移模型）。

肿瘤转移动态监测（如肺、骨转移）。

药物疗效评估（化疗、靶向治疗、免疫治疗）。

2. 培养与实验方法

（1）培养条件

培养基：DMEM（高糖）+ 10% FBS + 抗生素（如嘌呤霉素，用于维持筛选）。

培养环境：37℃、5% CO（与普通MDA-MB-231相同）。

稳定性检测：定期检测荧光素酶活性（避免基因沉默）。

（2）体内实验（小鼠模型）

 实验步骤

细胞接种（常用方式）：

皮下移植瘤：5×10 cells/小鼠（Matrigel增强成瘤）。

尾静脉注射（肺转移）：1×10 cells/小鼠。

原位注射（乳腺脂肪垫）：2×10 cells/小鼠。

成像前处理：

腹腔注射 D-荧光素（150 mg/kg），10-15 min后麻醉（异氟烷）并成像。

IVIS 成像：

曝光时间：1-5 min（依信号强度调整）。

数据分析：Living Image 软件量化光子数（p/s/cm2/sr）。

（3）体外荧光素酶检测

试剂：Bright-Glo 或 Steady-Glo 荧光素酶检测系统。

步骤：

铺板细胞（96孔板，约1×10 cells/孔）。

加入等体积荧光素酶底物，孵育10 min。

酶标仪检测化学发光信号（RLU值）。

 注意事项：

污染防控：细菌污染：培养液浑浊、变黄，需添加抗生素（如青霉素-链霉素），污染严重时丢弃。

霉菌污染：显微镜下可见丝状/絮状漂浮物，需彻底消毒培养箱（过氧乙酸擦拭+紫外线照射），污染细胞立即丢弃。

支原体污染：无明显外观变化，需定期用PCR或荧光法检测，污染后可用支原体清除试剂处理。

操作规范：收到细胞后，先检查包装完整性及干冰状态，镜检细胞形态并拍照记录（40x、100x、200x）。

未开封细胞若污染或活性差（3天内反馈），可申请重发；客户操作失误导致问题不重发。

运输与保存：干冰运输：冻存管含1×10⁶ cells，收到后立即转入液氮或-80℃冰箱。

常温运输：T25培养瓶，收到后静置3-4小时稳定状态，再换液或传代。

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