MDA-MB-231+GFP人乳腺癌X细胞+GFP

细胞属性

细胞特性

该细胞通过慢病毒转染的方式携带GFP基因。

1） 来源：乳腺癌

2） 形态：上皮细胞样 贴壁生长

3） 含量：>1x10^6  细胞数

4） 规格：T25瓶或者1mL冻存管包装

5)  用途：仅供科研使用。

1. MDA-MB-231细胞特性与GFP标记策略

基础特性：

表型：ER-/PR-/HER2-（TNBC），高转移潜能（倾向肺/骨转移）

培养条件：

培养基：DMEM高糖 + 10% FBS

传代：0.25%胰酶消化2-3分钟（易脱落，避免过度消化）

冻存：90% FBS + 10% DMSO（>1×10细胞/mL）

GFP标记方案：

方法

慢病毒转导

电转染质粒

CRISPR敲入

关键步骤：

慢病毒转导（最优选）：

MOI=10-20（预实验确定）

加Polybrene（4-8 μg/mL）增强感染

嘌呤霉素筛选（1-3 μg/mL，7天）

单克隆筛选：有限稀释法获得高表达克隆

验证：流式检测GFP阳性率（目标>95%）

2. 核心应用方向

2.1 转移研究（体外）

划痕实验：

1. 接种6孔板至90%汇合  

2. 200μL枪头划痕  

3. GFP荧光显微镜定时拍照（0/12/24h）  

Transwell侵袭：

基质胶（Matrigel 1:8稀释）预铺

10% FBS诱导，24h后4%多聚甲醛固定，DAPI复染

2.2 体内成像（小鼠模型）

肺转移模型：

尾静脉注射1×10 MDA-MB-231-GFP细胞

每周活体成像（IVIS）监测荧光信号

原位移植瘤：

乳腺脂肪垫注射（5×10细胞+Matrigel 1:1）

需使用NOD/SCID小鼠（避免免疫排斥）

2.3 药物筛选

动态监测：

处理紫杉醇（10-100 nM）或多柔比星（0.1-1 μM）

通过GFP荧光强度量化存活细胞

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