LS180人结直肠癌细胞

LS180人结直肠癌细胞

细胞特性:

LS 180是从患有Dukes型结肠腺癌的58岁女性高加索人结肠直肠腺癌的患者的结肠中分离的贴壁细胞系。LS174T (ECACC目录号87060401)来自同一名患者。

1） 来源：人，女性，结肠癌

2） 形态：上皮细胞样，贴壁生长

3） 含量：>1x10^6  细胞数

4） 规格：T25瓶或者1mL冻存管包装

5） 用途：仅供科研使用。

 1. LS180细胞基础特性

来源：源自50岁男性结直肠腺癌患者的原位肿瘤。

关键特征：

上皮细胞样，贴壁生长，可形成腺样结构。

表达肠道特异性标志物（如MUC2、CEA）。

对5-氟尿嘧啶（5-FU）等化疗药物敏感。

培养条件：

培养基：EMEM或DMEM + 10% FBS + 1% NEAA（非必需氨基酸）。

传代比例：1:3至1:5（80%汇合时，胰酶消化2-3分钟）。

冻存液：90% FBS + 10% DMSO。

 2. 荧光素酶标记（以慢病毒转导为例）

2.1 实验步骤

预实验：

测定LS180的慢病毒转导效率（建议使用MOI=5-20，梯度测试）。

优化Polybrene浓度（通常2-8 μg/mL）。

病毒转导：

细胞铺板：感染前24小时接种5×10^4细胞/孔（6孔板）。

加入慢病毒（含FLuc-PuroR基因）和Polybrene，孵育24小时后换液。

稳定筛选：

转导48小时后加入嘌呤霉素（1-3 μg/mL，剂量需预试），持续7-10天。

单克隆筛选：有限稀释法获得高表达克隆。

验证：

体外：检测荧光素酶活性（D-荧光素底物，IVIS成像）。

体内：皮下接种1×10^6 LS180-Luc细胞至裸鼠，监测肿瘤发光信号。

 注意事项：

污染防控：细菌污染：培养液浑浊、变黄，需添加抗生素（如青霉素-链霉素），污染严重时丢弃。

霉菌污染：显微镜下可见丝状/絮状漂浮物，需彻底消毒培养箱（过氧乙酸擦拭+紫外线照射），污染细胞立即丢弃。

支原体污染：无明显外观变化，需定期用PCR或荧光法检测，污染后可用支原体清除试剂处理。

操作规范：收到细胞后，先检查包装完整性及干冰状态，镜检细胞形态并拍照记录（40x、100x、200x）。

未开封细胞若污染或活性差（3天内反馈），可申请重发；客户操作失误导致问题不重发。

运输与保存：干冰运输：冻存管含1×10⁶ cells，收到后立即转入液氮或-80℃冰箱。

常温运输：T25培养瓶，收到后静置3-4小时稳定状态，再换液或传代。

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