HELA+LUC 人宫颈癌细胞荧光素酶标记

细胞属性：

角蛋白免疫过氧化物酶染色阳性。 有报告称MS751细胞含有人乳头状瘤病毒18 (HPV-18)序列。据报道，p53表达水平低，pRB(成视网膜细胞瘤抑制因子)表达水平正常。

该细胞通过慢病毒转染的方式携带Luc基因。

细胞特性

1） 来源：宫颈腺癌

2） 形态：上皮细胞样，贴壁生长

3） 含量：>1x10^6 个/mL

4） 污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性

5） 规格：T25瓶或者1mL冻存管包装

1细胞背景与构建原理

亲本细胞：

HeLa细胞（1951年从宫颈癌患者HenriettLacks分离）表型为上皮样贴壁生长。

荧光素酶标记方法：

常用载体：

慢病毒（如pLVX-EF1α-Luc2-Puro）；

质粒（如pcDNA3.1-Luc2-T2A-GFP，双标记）。

标记基因：

Luc2：优化版萤火虫荧光素酶，灵敏度较原始Luc高10倍；

筛选标记：通常携带嘌呤霉素（Puro）或新霉素（Neo）抗性。

基2核心科研应用础

（1）活体成像技术

动物模型：

皮下瘤：注射5×10细胞后7天可检测信号（IVIS系统，15mg/kD-荧光素底物）；

转移模型：尾静脉注射后通过肺/肝信号追踪转移（灵敏度达100个细胞）。

动态监测：

2024年NaturMethods报道双荧光素酶（Firefly+Renilla）用于治疗响应实时评估。

（2）高通量筛选

药物敏感性：

96孔板中通过发光值（RLU）量化细胞存活（Z’因子＞0.6）；

免疫治疗：

2025年CanceResearch利用HeLa-LUC评估CAR-T细胞杀伤效率。

3培养与实验要点

参数  标准操作  关键优化建议

培养基  DMEM高10FB1P/S  添加1 μg/mL嘌呤霉素维持标记

信号稳定性  每10代次检测发光强度（避免沉默）  冻存前验证Luc活性（＞10 RLU/10细胞）

底物处理  D-荧光素（15μg/mL）孵育10分钟  避免反复冻融底物（-80℃分装）

常见问题：

信号衰减：可能因启动子甲基化（建议使用EF1α或CMV强启动子）；

支原体污染：每月MycoAlert检测（Luc标记细胞更敏感）。

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