A549+RFP 人肺癌细胞+RFP

A549+RFP 人肺癌细胞+RFP

 细胞特性:

该细胞系由D.J.Griad通过肺癌组织移植培养建系，患者为58岁白人男性。A549能通过胞苷二磷酸胆碱途径合成含有高含量不饱和脂肪酸的卵磷脂。

该细胞通过慢病毒转染的方式携带RFP基因。

细胞特性

1） 来源：肺癌

2） 形态：上皮细胞样，多角形；贴壁生长

3） 含量：>1x10^6  细胞数

4） 规格：T25瓶或者1mL冻存管包装

5） 用途：仅供科研使用。

1细胞背景与构建

基础细胞系：A549源自一名58岁白人男性肺腺癌患者的原发肿瘤，是研究非小细胞肺癌（NSCLC）的经典模型。

RFP标记：

通过慢病毒或质粒转染稳定整合红色荧光蛋白（RFP）基因，激发光55nm/发射光57nm。

优势：比GFP更适用于多色标记实验（如与绿色荧光探针联用），且在深层组织中穿透性更好。

2培养条件与关键参数

培养基：F-12K或DMEM（高葡萄糖10FB1%双抗，需添筛选抗生素（如嘌呤霉素，浓度通常1-μg/mL）。

培养要点：

传代时胰酶消化时间控制在2分钟内（避免荧光蛋白降解）。

每2个月需流式分选（FACS）或有限稀释法筛选高RFP表达亚群。

3核心应用场景

转移与侵袭研究：

实时追踪体内转移（如尾静脉注射后通过小动物活体成像系统监测肺转移灶）。

3D肿瘤球模型结合共聚焦显微镜观察细胞侵袭动态。

药物筛选：

测试EGFR-TKI（如奥希替尼）或免疫治疗（PD-1抗体）对荧光标记细胞的杀伤效果。

肿瘤-微环境互作：

与荧光标记的巨噬细胞（如THP-1-GFP）共培养，可视化肿瘤相关巨噬细胞（TAM）浸润。

 注意事项：

污染防控：细菌污染：培养液浑浊、变黄，需添加抗生素（如青霉素-链霉素），污染严重时丢弃。

霉菌污染：显微镜下可见丝状/絮状漂浮物，需彻底消毒培养箱（过氧乙酸擦拭+紫外线照射），污染细胞立即丢弃。

支原体污染：无明显外观变化，需定期用PCR或荧光法检测，污染后可用支原体清除试剂处理。

操作规范：收到细胞后，先检查包装完整性及干冰状态，镜检细胞形态并拍照记录（40x、100x、200x）。

未开封细胞若污染或活性差（3天内反馈），可申请重发；客户操作失误导致问题不重发。

运输与保存：干冰运输：冻存管含1×10⁶ cells，收到后立即转入液氮或-80℃冰箱。

常温运输：T25培养瓶，收到后静置3-4小时稳定状态，再换液或传代。

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