A375+EGFP人恶性黑色素瘤细胞+EGFP 新品

A375+EGFP人恶性黑色素瘤细胞+EGFP

 细胞特性:

A375源自一位54岁女性，是Giard DJ等人建立的一系列细胞株中的一株。该细胞可在免疫抑制小鼠上成瘤，在琼脂上形成克隆。

A375-EGFP是在 A375细胞上用慢病毒标记上EGFP，可以显示绿色荧光，带有嘌呤霉素抗性。

细胞特性

1） 来源：人黑色素瘤

2） 形态：上皮细胞样，贴壁生长

3） 含量：>1x10^6  细胞数

4） 规格：T25瓶或者1mL冻存管包装

5）用途：仅供科研使用。

1细胞背景与构建

基础细胞系：A375源于一名54岁女性恶性黑色素瘤患者的皮肤转移灶，具有高转移性和侵袭性。

EGFP标记：通过质粒转染或慢病毒载体将EGFP基因整合至A375基因组，实现稳定表达绿色荧光蛋白（激发光48nm，发射光50nm）。

应用优势：

实时追踪：活细胞成像中可视化肿瘤细胞迁移、侵袭及转移（Transwel实验）。

体内外模型：适用于小鼠异种移植模型（皮下/尾静脉注射），通过荧光显微镜或小动物成像系统（IVIS）监测肿瘤生长。

2培养条件与关键参数

培养基：DMEM（高葡萄糖10FB1双抗，需添筛选抗生素（如G418，浓度根据转染载体确定，通常100-50μg/mL）。

培养要点：

定期检测荧光强度，避免传代次数过多导致EGFP表达丢失。

建议每3-6个月进行单克隆筛选，维持高荧光纯度。

3实验应用方向

转移机制研究：

结合划痕实验、3D肿瘤球模型（Matrigel）观察EGFP标记细胞的动态侵袭过程。

药物筛选：

测试靶向药物（如BRAF抑制剂维莫非尼）对荧光标记细胞的凋亡/增殖影响（联用Hoechs33342/PI染色）。

免疫治疗：

与CAR-T细胞共培养，通过荧光强度变化评估肿瘤细胞杀伤效率。

 注意事项：

污染防控：细菌污染：培养液浑浊、变黄，需添加抗生素（如青霉素-链霉素），污染严重时丢弃。

霉菌污染：显微镜下可见丝状/絮状漂浮物，需彻底消毒培养箱（过氧乙酸擦拭+紫外线照射），污染细胞立即丢弃。

支原体污染：无明显外观变化，需定期用PCR或荧光法检测，污染后可用支原体清除试剂处理。

操作规范：收到细胞后，先检查包装完整性及干冰状态，镜检细胞形态并拍照记录（40x、100x、200x）。

未开封细胞若污染或活性差（3天内反馈），可申请重发；客户操作失误导致问题不重发。

运输与保存：干冰运输：冻存管含1×10⁶ cells，收到后立即转入液氮或-80℃冰箱。

常温运输：T25培养瓶，收到后静置3-4小时稳定状态，再换液或传代。

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