NAD苹果酸酶(NAD-ME)测定试剂盒/微量法/96样

NAD苹果酸酶(NAD-ME)测定试剂盒/微量法/96样

测定意义：

ME 广泛存在于微生物、培养细胞、动物和植物胞浆中，尤其在植物组织中活性较高。ME 催化苹果酸氧化脱羧的可逆反应，产生丙酮酸和 CO2 ，以及伴随 NAD(P)+ 的还原反应，是苹果酸代谢的关键酶。ME 活性与生物合成和抗氧化密切相关。近年来植物 ME 活性测定较多，已经成为抗氧化研究的热点。根据辅酶专一性和对底物特异性的不同，可将 ME 分为 NAD-ME(EC1.1.1.38)和 NADP-ME(EC1.1.1.40)。

测定原理：

NAD-ME 催化 NAD+还原成 NADH ，在 340nm 下测定 NADH 增加速率。

自备仪器和用品：

紫外分光光度计/酶标仪、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96 孔板和蒸馏水。

测定步骤：
1、分光光度计或酶标仪预热 30min  以上，调节波长至 340nm，蒸馏水调零。

2、检测工作液的配制：用时在试剂三中加入 15mL 试剂一和 1mL 蒸馏水，充分混匀待用；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。

3、测定前将检测工作液在37℃（哺乳动物）或 25℃（其它物种）水浴 10min 以上。

4、在微量石英比色皿或 96 孔板中加入 10μL 样本、55μL 试剂二和 160μL 工作液，混匀后立即记录 340nm处初始吸光值 A1 和 1min 后的吸光值 A2 ，计算 ΔA=A2-A1。

注 意：

如果 ΔA＜0.005 ，可将反应时间延长到 2 分钟或 5 分钟。