线粒体异柠檬酸脱氢酶检测试剂盒（微量法100T/96S） 新品

线粒体异柠檬酸脱氢酶（ICDHm）试剂盒说明书

                                                  微量法 100管/96样

正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定                                             

测定意义：

ICDHm（EC 1.1.1.41）广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞的线粒体中，在三羧酸循中催化异柠檬酸生成α-酮戊二酸，同时将NAD+ 还原为NADH，是三羧酸循环的限速酶之一，其催化的反应是细胞NADH主要来源之一。

测定原理：

ICDHm催化NAD+ 还原生成NADH，导致340nm处光吸收上升。

自备仪器和用品：

紫外分光光度计/酶标仪、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研钵、冰和蒸馏水。

样本的前处理：

组织、细菌或细胞中胞浆蛋白与线粒体蛋白的分离：

1. 称取约0.1g组织或收集500万细胞，加入1ml试剂一和10μl 试剂三，用冰浴匀浆器或研钵匀浆。

2. 将匀浆600g，4℃离心5min。

3. 弃沉淀，将上清液移至另一离心管中，11000g，4℃离心10min。

4. 上清液即胞浆提取物，可用于测定从线粒体泄漏的ICDHm（此步可选做）。

5. 在步骤④的沉淀中加入200μl试剂二和2μl 试剂三，超声波破碎（冰浴，功率20％或200W，超声3秒，间隔10秒，重复30次），用于线粒体ICDHm活性测定。

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