延胡索酸酶(富马酸酶)活性测定试剂盒微板法/96样

延胡索酸酶(富马酸酶)活性测定试剂盒微板法/96样

产品简介：

延胡索酸酶又名延胡索酸水化酶（EC4.2.1.2），存在于线粒体中的富马酸酶是柠檬酸循环中的关键酶之一，存在于胞质中的富马酸酶与氨基酸和富马酸酯的代谢关系密切。

在人类中，该酶缺失会导致严重的健康问题，例如胎儿脑畸形，肌张力低下等。延胡索酸酶催化延胡索酸转化成  L-苹果酸，L-苹果酸在苹果酸脱氢酶的作用下，同时使  NAD+还原成NADH，通过检测  NADH  在 340nm 的增加速率得出延胡索酸酶的活性大小。

试剂盒组成和配制：

所需的仪器和用品：
酶标仪、96 孔板、可调式移液器、低温离心机、研钵。

延胡索酸酶活性测定:
建议正式实验前选取 2 个样本做预测定，了解本批样品情况，熟悉实验流程，避免实验样本和试剂浪费！

样本制备：
线粒体制备（提示：整个线粒体的提取过程须保持 4℃低温环境）：

① 称取约 0.1g 组织或收集  500 万细胞，加入  1mL 试剂一 ，用冰浴匀浆器或研钵匀浆，转移至离心管后于 4℃×700g 离心  10min。

② 弃沉淀，上清液移至另一离心管中，4℃×12000g 离心  10min。上清液即胞浆提取物，可用于测定胞浆中的延胡索酸酶（此步可选做），沉淀为线粒体。

③ 在沉淀（线粒体）中加入 200μL 试剂二和 2μL 试剂三，超声波破碎（冰浴，功率 20％或200W ，超声 3s ，间隔 10 秒，重复 30 次） ，液体置于冰上用于线粒体中延胡索酸酶活性测定。

[注]：若增加样本量，可按照组织质量(g)：提取液体积(mL)为  1 ：5~10  的比例进行提取，或按照细胞数量(104)：提取液(mL)为  500~1000： 1 的比例进行提取。