苯胺4羟化酶(AH)测定试剂盒/微量法/48样

苯胺4羟化酶(AH)测定试剂盒/微量法/48样

测定意义：

细胞色素 P450 酶是一组主要存在于肝脏的同工酶，在外源物质代谢中具有重要作用，尤其是药物和毒物的代谢。AH 在 P450 酶系中相当于 CYP2E1 亚型，CYP2E1 不仅参与了药物的代谢，而且还能催化多种前致癌物和前毒物的活化过程。

测定原理：

AH 催化苯胺羟化后产生的 4-氨基酚，进一步转变为酚-吲哚复合物，在 630nm 处有特征吸收峰；通过测定630nm 吸光度增加速率，来计算 AH 活性。

自备仪器和用品：

普通离心机、超速离心机、可见分光光度计/酶标仪、微量玻璃比色皿/96 孔板、双蒸水和冰。

测定操作：
1.  分光光度计/酶标仪预热 30 min ，调节波长到 630 nm，蒸馏水调零。

2. 试剂三置于 37℃水浴中预热 30min。

3.  试剂五置于冰浴预冷 30min。

4. 标准管：取 0.5 mL EP 管，加入 100μL 标准液，100μL 试剂六，100μL 试剂七，混匀后室温静置 30min，吸取 200μL 于微量玻璃比色皿/96 孔板，630 nm 测定光吸收，记为 A 标准管。

5.   对照管：取 0.5 mL EP 管，加入 50μL 粗酶液，100μL 试剂三，50μL 蒸馏水，混匀后 37℃水浴中保温30min；再加入 100μL 试剂五，混匀后冰浴 5min ，11000rpm ，4℃, 离心 10min；取 100μL 上清液，加入新的 0.5 mL EP 管；再加入 100μL 试剂六，100μL 试剂七，混匀后室温静置 30min ，吸取 200μL 于微量玻璃比色皿/96 孔板，630 nm 测定光吸收，记为 A 对照管。
6.  测定管：取 0.5 mL EP 管，加入 50μL 粗酶液，100μL 试剂三，50μL 试剂四，混匀后 37℃水浴中保温30min；再加入 100μL 试剂五，混匀后冰浴 5min ，11000rpm ，4℃, 离心 10min；取 100μL 上清液，加入新的 0.5 mL EP 管；再加入 100μL 试剂六，100μL 试剂七，混匀后室温静置 30min ，吸取 200μL 于微量玻璃比色皿/96 孔板，630 nm 测定光吸收，记为 A 测定管。

注 意：

正式测定之前选择 2-3 个预期差异大的样本做预测定。