红霉素-N-脱甲基酶(ERND)测定试剂盒/微量法/48S 新品

红霉素-N-脱甲基酶(ERND)测定试剂盒/微量法/48S

测定意义：

细胞色素 P450 酶是一组主要存在于肝脏的酶系，在外源物质代谢中，尤其是药物和毒物的代谢，具有重要作用。ERND 在 P450 酶系中相当于 CYP2B 亚型，与药物代谢的去甲基化密切相关。CYP2B 具有催化底物形成非活性易于排泄的代谢产物而具有解毒作用，也可使某些药物经 CYP2B 代谢活化。

测定原理：

ERND 催化红霉素释放甲醛，通过 Nash 比色测定甲醛含量，即可计算出 ERND 活性。

自备仪器和用品：

普通离心机，超速离心机、可调式移液枪、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96 孔板、蒸馏水和冰。

测定操作：
1.  分光光度计/酶标仪预热 30 min ，调节波长到 412 nm，蒸馏水调零。

2. 试剂二置于 37℃水浴中预热 30 min。

3.  对照管：取 0.5mL EP 管，加入 10μL 粗酶液，170μL 试剂二，10μL 试剂三，10μL 蒸馏水，混匀后置于37℃水浴保温30min；立即加入 35μL 试剂五，混匀后置于冰浴中 5min；取出后加入 35μL 试剂六，混匀后室温静置 5min；室温 8000rpm 离心 5min；取新的 EP 管，加入 100μL 上清液，100μL 试剂七，混匀后 60℃水浴 10min，然后取出，用冷水冷却 5min ，于 412nm 测定光吸收，记为 A 对照管。

4.  测定管：取 0.5mL EP 管，加入 10μL 粗酶液，170μL 试剂二，10μL 试剂三，10μL 试剂四，混匀后置于 37 ℃水浴保温30min；立即加入 35μL 试剂五，混匀后置于冰浴中 5min；取出后加入 35μL 试剂六，混匀后室温静置 5min；室温 8000rpm 离心 5min；取新 EP 管，加入 100μL 上清液，100μL 试剂七，混匀后 60℃水浴 10min，然后取出，用冷水冷却 5min ，于 412nm 测定光吸收，记为 A 测定管。

5.  标准管：取 0.5mL EP 管，加入 100μL 标准品，100μL 试剂七，混匀后 60℃水浴 10min，然后取出，用冷水冷却 5min ，于 412nm 测定光吸收，记为 A 标准管。

注意：每个样品都需要做对照管。

注 意：

正式测定之前选择 2-3 个预期差异大的样本做预测定。