红霉素-N-脱甲基酶(ERND)测定试剂盒/分光光度法/24样 新品

红霉素-N-脱甲基酶(ERND)测定试剂盒/分光光度法/24样

测定意义：

细胞色素 P450 酶是一组主要存在于肝脏的酶系，在外源物质代谢中，尤其是药物和毒物的代谢，具有重要作用。ERND 在 P450 酶系中相当于 CYP2B 亚型，与药物代谢的去甲基化密切相关。CYP2B 具有催化底物形成非活性易于排泄的代谢产物而具有解毒作用，也可使某些药物经 CYP2B 代谢活化。

测定原理：

ERND 催化红霉素释放甲醛，通过 Nash 比色测定甲醛含量，即可计算出 ERND 活性。

自备仪器和用品：

可见分光光度计、普通离心机，超速离心机、可调式移液枪、1mL 玻璃比色皿、蒸馏水和冰。

测定操作：
1.  分光光度计预热 30 min 以上，调节波长到 412 nm，蒸馏水调零。

2. 试剂二置于 37℃水浴中预热 30 min。

3.  对照管：取 1 支 EP 管，加入 50μL 粗酶液，850μL 试剂二，50μL 试剂三，50μL 蒸馏水，混匀后置于37℃水浴保温30min；立即加入 175μL 试剂五，混匀后置于冰浴中 5min；取出后加入 175μL 试剂六，混匀后室温静置 5min；室温 8000rpm 离心 5min；取新的 EP 管，加入 500μL 上清液，500μL 试剂七，混匀后水浴 10min，然后取出，用冷水冷却 5min ，于 412nm 测定光吸收，记为 A 对照管。

4.  测定管：取 1 支 EP 管，加入 50μL 粗酶液，850μL 试剂二，50μL 试剂三，50μL 试剂四，混匀后置于37℃水浴保温30min；立即加入 175μL 试剂五，混匀后置于冰浴中 5min；取出后加入 175μL 试剂六，混匀后室温静置 5min；室温 8000rpm 离心 5min；取 1 支新 EP 管，加入 500μL 上清液，500μL 试剂七，混匀后60℃水浴 10min，然后取出，用冷水冷却 5min ，于 412nm 测定光吸收，记为 A 测定管。

5.  标准管：取 1 支 EP 管，加入 500μL 标准品，500μL 试剂七，混匀后 60℃水浴 10min，然后取出，用冷水冷却 5min ，于 412nm 测定光吸收，记为 A 标准管。

注 意：

正式测定之前选择 2-3 个预期差异大的样本做预测定。