人肺癌细胞；CAL-12T

                                                           人肺癌细胞；CAL-12T
产品信息：

CAL-12T是一种人非小细胞肺癌细胞系，常用于肺癌相关研究。以下是关于CAL-12T细胞的详细说明、培养操作和特性：

细胞特性

来源：CAL-12T细胞系来源于一名55岁白人男性非小细胞肺癌患者的肺组织。

形态：上皮细胞样，贴壁生长。

生长特性：生长速度中等，倍增时间约为35小时。

应用：广泛用于非小细胞肺癌的研究，包括肿瘤生物学、药物筛选、信号通路研究及治疗反应评估等。

2. 培养操作

2.1. 培养基

使用MEM（Minimum Essential Medium）培养基，添加10%胎牛血清（FBS）和1%青霉素-链霉素溶液（双抗）。

2.2. 培养条件

温度：37°C。

气体环境：95%空气 + 5% CO。

湿度：饱和湿度。

2.3. 传代步骤

观察细胞密度：当细胞融合度达到80%-90%时进行传代。

去除旧培养基：轻轻吸去培养瓶中的旧培养基。

清洗细胞：用预热的PBS轻轻清洗细胞1-2次。

消化细胞：加入适量的0.25%胰蛋白酶-EDTA溶液，置于37°C培养箱中消化1-2分钟，显微镜下观察细胞消化情况。

终止消化：加入适量含血清的新培养基终止消化，轻轻吹打使细胞脱落并均匀悬浮。

分装细胞：将细胞悬液按1:2至1:6的比例分装到新的培养瓶中，加入新鲜培养基。

继续培养：将培养瓶放回培养箱中继续培养。

2.4. 冻存与复苏

冻存：使用含有90%胎牛血清和10%DMSO的冻存液，将细胞悬液分装到冻存管中，按照标准冻存程序逐步降温后存放在液氮罐中[。

复苏：从液氮中取出冻存管，迅速放入37°C水浴中摇晃解冻，然后将细胞悬液转移到含有预热培养基的离心管中，离心后弃去上清液，用新鲜培养基重悬细胞，接种到培养瓶中继续培养。

3. 注意事项

细胞状态监控：定期观察细胞形态和生长状态，确保无污染，并根据实验需求调整传代比例和培养条件。

实验应用：在进行药物筛选或信号通路研究时，建议根据具体实验设计调整细胞密度和培养条件，以获得最佳实验结果。

基本操作步骤：

原代培养：取材→分离→培养，需保持材料新鲜及严格无菌2。

传代培养：贴壁细胞需胰酶消化，悬浮细胞可直接传代，离心后重悬分瓶23。

冻存与复苏：使用含10%DMSO的冻存液，程序降温后液氮保存；复苏时快速37℃水浴解冻。

培养操作要点：

基础培养基选择：分为天然培养基、合成培养基（如DMEM、RPMI 1640）和无血清培养基45。目前以合成培养基和无血清培养基使用居多。

培养条件设置：

温度：多数人和哺乳动物细胞为36-37℃，昆虫细胞为27℃。

pH值：多数哺乳动物细胞为7.4，昆虫细胞为6.2。

CO₂浓度：通常维持5-7% CO₂，多数细胞适合5% CO₂气氛。

渗透压：控制在260-320mOsm/kg为宜。

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具体特点如下：

环境与营养：需无菌环境、精确的温度（36-37℃）和pH（7.2-7.4），动物细胞常需血清，植物细胞需激素。

生长方式：贴壁细胞需表面附着，悬浮细胞自由漂浮，半贴壁半悬浮兼具两者特性。

传代与密度：贴壁细胞需胰酶消化传代，悬浮细胞直接分瓶；密度达80%-90%时需传代，避免营养枯竭与代谢抑制。

敏感性：对剪切应力、污染、温度变化敏感，需定期更换培养液清除代谢物。

应用与局限：便于活细胞观察与实验控制，但体外环境与体内存在差异，长期传代可能导致遗传不稳定与去分化。