人肺腺癌细胞带荧光素酶；PC-9/LUC

                                                           人肺腺癌细胞带荧光素酶；PC-9/LUC
产品信息：

PC-9/LUC 是一种经过荧光素酶（Luciferase）基因转染的人肺腺癌细胞系，常用于肿瘤生物学研究，特别是体内成像和肿瘤生长监测。以下是其详细说明、培养操作及特性：

1. 细胞背景

来源：PC-9细胞源自人肺腺癌组织，LUC表示该细胞系经过荧光素酶基因转染，可用于生物发光成像（BLI）

应用：常用于肺癌的生长、转移及治疗反应的体内研究，通过荧光素酶报告基因实现实时监测

细胞特性

形态：上皮样细胞，贴壁生长。

生长特性：倍增时间约为24-30小时，需在适宜条件下维持指数生长。

荧光素酶表达：可在加入底物D-荧光素后发出生物荧光，便于活体成像。

3. 培养操作

培养基

推荐使用含10%胎牛血清（FBS）、1%抗生素（如青霉素/链霉素）的RPMI 1640培养基。

培养条件

温度：37℃。

气体环境：5% CO、95%空气的湿润培养箱。

传代步骤

观察细胞：当细胞汇合度达到80%-90%时进行传代。

移除旧培养基：轻轻吸出旧培养基，用PBS清洗细胞一次。

消化细胞：加入适量胰酶-EDTA溶液，37℃孵育至细胞脱落（通常1-2分钟）。

终止消化：加入含血清的培养基终止胰酶作用，轻轻吹打使细胞悬浮。

分装细胞：将细胞悬液按适当比例分装到新培养瓶中，补加新鲜培养基。

继续培养：置于培养箱中继续培养，定期观察细胞状态。

冻存与复苏

冻存：使用含10% DMSO和90% FBS的冻存液，分装至冻存管中，逐步降温后存于液氮罐或-80℃冰箱。

复苏：从液氮中取出冻存管，迅速投入37℃水浴中融化，随后转移至含预热培养基的培养瓶中，轻轻混匀后放入培养箱。

4. 注意事项

无菌操作：全程需在超净工作台中进行，避免污染。

定期检测：建议定期进行支原体检测和STR鉴定，确保细胞系的纯度和身份。

荧光素酶检测：进行生物发光成像前，需加入适量D-荧光素底物，并在避光条件下进行检测。

基本操作步骤：

原代培养：取材→分离→培养，需保持材料新鲜及严格无菌2。

传代培养：贴壁细胞需胰酶消化，悬浮细胞可直接传代，离心后重悬分瓶23。

冻存与复苏：使用含10%DMSO的冻存液，程序降温后液氮保存；复苏时快速37℃水浴解冻。

培养操作要点：

基础培养基选择：分为天然培养基、合成培养基（如DMEM、RPMI 1640）和无血清培养基45。目前以合成培养基和无血清培养基使用居多。

培养条件设置：

温度：多数人和哺乳动物细胞为36-37℃，昆虫细胞为27℃。

pH值：多数哺乳动物细胞为7.4，昆虫细胞为6.2。

CO₂浓度：通常维持5-7% CO₂，多数细胞适合5% CO₂气氛。

渗透压：控制在260-320mOsm/kg为宜。

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具体特点如下：

环境与营养：需无菌环境、精确的温度（36-37℃）和pH（7.2-7.4），动物细胞常需血清，植物细胞需激素。

生长方式：贴壁细胞需表面附着，悬浮细胞自由漂浮，半贴壁半悬浮兼具两者特性。

传代与密度：贴壁细胞需胰酶消化传代，悬浮细胞直接分瓶；密度达80%-90%时需传代，避免营养枯竭与代谢抑制。

敏感性：对剪切应力、污染、温度变化敏感，需定期更换培养液清除代谢物。

应用与局限：便于活细胞观察与实验控制，但体外环境与体内存在差异，长期传代可能导致遗传不稳定与去分化。