人骨肉瘤细胞；MNNG/HOS Cl #5[R-1059-D] (STR)

                                                           人骨肉瘤细胞；MNNG/HOS Cl #5[R-1059-D] (STR)
产品信息：

人骨肉瘤细胞MNNG/HOS Cl #5 [R-1059-D]是一种来源于13岁白人女性骨肉瘤组织的永生化细胞系，通过HOS细胞经MNNG化学转化获得，具有贴壁生长、上皮细胞样形态等特征。该细胞系在骨肉瘤转移机制研究、药物筛选及肿瘤免疫治疗等领域具有重要应用价值。

基本信息与来源

细胞来源：该细胞系是从13岁白人女性骨肉瘤组织中分离的HOS细胞经0.01mcg/ml MNNG（致癌亚硝胺）转化而来。

别称：包括MNNG/HOS、MNNG-HOS、HOS-MNNG、TE85等多种命名。

STR鉴定：Amelogenin: X; CSF1PO: 12; D13S317: 12; D16S539: 10,13; D5S818: 13; D7S820: 11,12; TH01: 6; TPOX: 8,11; vWA: 18等位点特征。

细胞特性与应用

生长特性：贴壁生长，上皮细胞样形态，饱和密度高，在软琼脂中克隆形成率高，能在裸鼠中成瘤。

功能特性：具有较强转移能力，模拟骨肉瘤转移过程，用于转移机制研究、药物筛选、肿瘤免疫治疗及耐药性机制研究。

培养条件：气相95%空气+5%CO，温度37℃，培养基常用MEM（含NEAA）+10%FBS+1%P/S或EMEM+10%FBS。

传代比例：1:2～1:4传代，消化时间2-3秒（胰酶法），倍增时间每周2-3次。

培养操作步骤

传代操作：细胞密度达80%-90%时，弃上清，PBS润洗1-2次，加0.25%胰酶-0.53mM EDTA消化1-2分钟（37℃），显微镜观察细胞变圆脱落时终止消化，离心（1000RPM，4分钟）后重悬分瓶。

冻存操作：细胞消化后离心，弃上清，加冻存液（90%FBS+10%DMSO或无血清冻存液）至1×10?细胞/ml，程序降温后-80℃保存或液氮存储。

复苏操作：冻存管37℃水浴快速解冻，混入含5ml培养基的离心管，离心后重悬接种T25瓶，37℃培养箱培养，次日换液。

注意事项与问题处理

污染控制：支原体、细菌、真菌检测需阴性，培养基更换每周2-3次，避免小黑点污染（可能为“黑胶虫”或蛋白结晶）。

操作要点：胰酶消化时间需严格控制，避免过度消化损伤细胞；离心后上清处理需用移液枪吸净，减少细胞损失。

特殊问题：悬浮细胞转染效率低时，可选用非脂质体转染试剂或电转染方法提高效率。

基本操作步骤：

原代培养：取材→分离→培养，需保持材料新鲜及严格无菌2。

传代培养：贴壁细胞需胰酶消化，悬浮细胞可直接传代，离心后重悬分瓶23。

冻存与复苏：使用含10%DMSO的冻存液，程序降温后液氮保存；复苏时快速37℃水浴解冻。

培养操作要点：

基础培养基选择：分为天然培养基、合成培养基（如DMEM、RPMI 1640）和无血清培养基45。目前以合成培养基和无血清培养基使用居多。

培养条件设置：

温度：多数人和哺乳动物细胞为36-37℃，昆虫细胞为27℃。

pH值：多数哺乳动物细胞为7.4，昆虫细胞为6.2。

CO₂浓度：通常维持5-7% CO₂，多数细胞适合5% CO₂气氛。

渗透压：控制在260-320mOsm/kg为宜。

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具体特点如下：

环境与营养：需无菌环境、精确的温度（36-37℃）和pH（7.2-7.4），动物细胞常需血清，植物细胞需激素。

生长方式：贴壁细胞需表面附着，悬浮细胞自由漂浮，半贴壁半悬浮兼具两者特性。

传代与密度：贴壁细胞需胰酶消化传代，悬浮细胞直接分瓶；密度达80%-90%时需传代，避免营养枯竭与代谢抑制。

敏感性：对剪切应力、污染、温度变化敏感，需定期更换培养液清除代谢物。

应用与局限：便于活细胞观察与实验控制，但体外环境与体内存在差异，长期传代可能导致遗传不稳定与去分化。