人乳腺导管癌细胞带荧光素酶；BT474/LUC (STR)

产品信息：

BT474/LUC细胞是一种经过基因工程改造的人乳腺导管癌细胞系，源自原始的BT-474细胞系，携带荧光素酶（Luciferase）基因，常用于肿瘤生长、转移和治疗反应的体内成像研究。以下是其详细说明、培养操作和特性：

细胞特性

来源：BT474/LUC细胞是从人乳腺浸润性导管癌中分离得到的BT-474细胞系衍生而来，属于HER2过表达型乳腺癌细胞。

荧光素酶标记：该细胞系稳定整合了荧光素酶基因，可在加入底物荧光素（Luciferin）后发出生物荧光，便于活体成像和实时监测肿瘤生长或转移

形态：上皮细胞样，贴壁生长。

应用：常用于肿瘤生物学研究，如药物筛选、肿瘤生长动力学、转移机制及治疗反应评估等

2. 培养操作

2.1. 培养基

使用RPMI-1640培养基，添加10%胎牛血清（FBS）和1%青霉素-链霉素溶液（双抗）

2.2. 培养条件

温度：37°C。

气体环境：95%空气 + 5% CO。

湿度：饱和湿度。

2.3. 传代步骤

观察细胞密度：当细胞融合度达到80%-90%时进行传代。

去除旧培养基：轻轻吸去培养瓶中的旧培养基。

清洗细胞：用预热的PBS轻轻清洗细胞一次。

消化细胞：加入适量的0.25%胰蛋白酶-EDTA溶液，置于37°C培养箱中消化1-2分钟，显微镜下观察细胞消化情况。

终止消化：加入适量含血清的新培养基终止消化，轻轻吹打使细胞脱落并均匀悬浮。

分装细胞：将细胞悬液按1:2至1:5的比例分装到新的培养瓶中，加入新鲜培养基。

继续培养：将培养瓶放回培养箱中继续培养。

2.4. 冻存与复苏

冻存：使用含有90%胎牛血清和10%DMSO的冻存液，将细胞悬液分装到冻存管中，按照标准冻存程序逐步降温后存放在液氮罐中。

复苏：从液氮中取出冻存管，迅速放入37°C水浴中摇晃解冻，然后将细胞悬液转移到含有预热培养基的离心管中，离心后弃去上清液，用新鲜培养基重悬细胞，接种到培养瓶中继续培养。

3. 注意事项

荧光素酶活性检测：在进行生物发光成像前，需向细胞或动物模型中加入荧光素底物，使用活体成像系统（IVIS）检测发光信号。

细胞状态监控：定期观察细胞形态和生长状态，确保无污染，并根据实验需求调整传代比例和培养条件。

培养操作要点：

基础培养基选择：分为天然培养基、合成培养基（如DMEM、RPMI 1640）和无血清培养基45。目前以合成培养基和无血清培养基使用居多。

培养条件设置：

温度：多数人和哺乳动物细胞为36-37℃，昆虫细胞为27℃。

pH值：多数哺乳动物细胞为7.4，昆虫细胞为6.2。

CO₂浓度：通常维持5-7% CO₂，多数细胞适合5% CO₂气氛。

渗透压：控制在260-320mOsm/kg为宜。

功能特点

通过被动运输和主动运输实现物质跨膜转运；以ATP为核心载体，通过线粒体氧化磷酸化或叶绿体光合磷酸化途径供能；通过受体-第二信使-效应器的级联反应模式进行信号转导；原核细胞采用二分裂，真核细胞则通过有丝分裂、减数分裂等方式繁殖；细胞可进行程序性死亡（凋亡），并在多细胞生物中实现分化形成不同组织

注意事项与应用

无菌操作：必须严格无菌无毒，避免微生物污染和不同细胞间交叉污染。

营养需求：需提供氨基酸、维生素、无机盐、促生长因子等，动物细胞还需血清。

抗生素使用：可添加双抗或三抗预防污染，但长期培养不建议持续使用，以防产生耐药性。

细胞培养技术是生物医学研究的基础工具，可用于细胞生理代谢、药物筛选、疫苗生产等研究。不同细胞系的具体培养条件需参考相关文献或实验经验调整。

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