人结肠癌细胞带荧光素酶；HT-29/LUC (STR) 新品

                                                           人结肠癌细胞带荧光素酶；HT-29/LUC (STR)
产品信息：

HT-29/LUC 是一种稳定表达荧光素酶的人结肠癌细胞系，由 HT-29 细胞通过慢病毒转染携带 Luc 基因构建而成，常用于活体动物成像实验和荧光素酶活性检测。

来源与构建

该细胞系基于 HT-29 细胞（来源于人结肠腺癌），通过慢病毒转染方式导入 Luc 基因，使其稳定表达荧光素酶。

背景信息：HT-29 细胞最初由 J. Fogh 于 1964 年从一名 44 岁女性结肠癌患者的原发肿瘤分离获得，而 HT-29/LUC 则在此基础上增加了荧光素酶标记。

形态与生长特性

形态：上皮细胞样，贴壁生长。

生长特性：培养条件为 37℃、5% CO，推荐培养基为 90% DMEM 高糖培养基与 10% FBS 混合，并添加青霉素和链霉素（PS）。

药筛信息：Puro 药筛浓度为 1.0 μg/ml，培养过程中通常无需额外添加，但若担心抗性减弱，可定期用 0.5 μg/ml 浓度维持。

培养操作指南

复苏操作

将冻存管在 37℃ 水浴中快速解冻，加入 4-5 mL 预热的完全培养基混匀。

1000 rpm 离心 3-5 分钟，弃上清后用新鲜培养基重悬，接种至 T25 培养瓶或 6 cm 皿，加入 4-8 mL 培养基，置于 37℃、5% CO 培养箱中培养过夜。

第二天换液并检查细胞密度，若细胞密度达 80%-90%，可进行传代。

传代方法

当细胞密度达到 80%-90% 时，进行传代。

弃去培养上清，用不含钙、镁离子的 PBS 润洗 1-2 次。

加入 1 mL 消化液（0.25% Trypsin-0.02% EDTA）于培养瓶中，37℃ 消化 1-3 分钟，显微镜下观察细胞变圆并脱落时，加入含血清的培养基终止消化。

轻轻吹打制成单细胞悬液，1000 rpm 离心 3-5 分钟，弃上清后用新鲜培养基重悬，按 1:2 至 1:3 比例分装至新培养瓶，补加 5-8 mL 培养基继续培养。

冻存操作

待细胞生长状态良好时，进行冻存。

收集细胞悬液，1000 rpm 离心 4 分钟，弃上清后用 PBS 清洗一遍，计数。

根据细胞数量加入无血清冻存液，调整细胞密度至 5×10?～1×10?/mL，每支冻存管冻存 1 mL 细胞悬液。

将冻存管放入 -80℃ 冰箱，24 小时后转入液氮灌储存。

注意事项与应用

操作要点

收到细胞后，首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象，干冰运输的细胞需检查干冰是否完全挥发，若有异常请及时联系供应商。

用 75% 酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态，因运输问题部分细胞可能形成碎片，属正常现象。

仔细阅读说明书，确保培养条件一致，若因培养条件不一致导致细胞问题，责任由客户自行承担。

建议客户收到细胞后前 3 天各拍几张细胞照片，记录细胞状态，以便与供应商技术部沟通。

基本操作步骤：

原代培养：取材→分离→培养，需保持材料新鲜及严格无菌2。

传代培养：贴壁细胞需胰酶消化，悬浮细胞可直接传代，离心后重悬分瓶23。

冻存与复苏：使用含10%DMSO的冻存液，程序降温后液氮保存；复苏时快速37℃水浴解冻。

培养操作要点：

基础培养基选择：分为天然培养基、合成培养基（如DMEM、RPMI 1640）和无血清培养基45。目前以合成培养基和无血清培养基使用居多。

培养条件设置：

温度：多数人和哺乳动物细胞为36-37℃，昆虫细胞为27℃。

pH值：多数哺乳动物细胞为7.4，昆虫细胞为6.2。

CO₂浓度：通常维持5-7% CO₂，多数细胞适合5% CO₂气氛。

渗透压：控制在260-320mOsm/kg为宜。

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具体特点如下：

环境与营养：需无菌环境、精确的温度（36-37℃）和pH（7.2-7.4），动物细胞常需血清，植物细胞需激素。

生长方式：贴壁细胞需表面附着，悬浮细胞自由漂浮，半贴壁半悬浮兼具两者特性。

传代与密度：贴壁细胞需胰酶消化传代，悬浮细胞直接分瓶；密度达80%-90%时需传代，避免营养枯竭与代谢抑制。

敏感性：对剪切应力、污染、温度变化敏感，需定期更换培养液清除代谢物。

应用与局限：便于活细胞观察与实验控制，但体外环境与体内存在差异，长期传代可能导致遗传不稳定与去分化。