人胃癌细胞带荧光素酶；MKN-45/LUC

                                                           人胃癌细胞带荧光素酶；MKN-45/LUC
产品信息：

人胃癌细胞MKN-45/LUC是一种经过基因改造的胃癌细胞系，携带荧光素酶（Luciferase）基因，常用于活体成像和肿瘤研究。以下是关于MKN-45/LUC细胞的详细说明、培养操作及特性：

细胞特性

来源：MKN-45细胞系源自日本一名低分化胃腺癌患者的肝转移灶，MKN-45/LUC是通过基因工程手段将荧光素酶基因转入MKN-45细胞而获得的衍生物。

形态：上皮细胞样，呈贴壁生长。

生长特性：半贴壁半悬浮生长，易于形成细胞团簇。

荧光素酶表达：稳定表达萤火虫荧光素酶，可在加入底物荧光素（Luciferin）后发出生物荧光，适用于活体成像和高灵敏度检测。

2. 培养条件

培养基：RPMI-1640培养基 + 10%胎牛血清（FBS） + 1%双抗（青霉素/链霉素）。

培养环境：37°C、5% CO、饱和湿度培养箱

换液频率：每2-3天换液一次，或根据细胞密度和培养基颜色变化及时更换。

3. 培养操作

3.1. 细胞复苏

从液氮中取出冻存管，迅速放入37°C水浴中，轻轻摇晃至完全解冻。

将细胞悬液转移至含有5-6 mL预热培养基的离心管中，1000 rpm离心5分钟，弃去上清。

加入4-6 mL新鲜培养基重悬细胞，转移至培养瓶中，置于培养箱中培养过夜。

第二天观察细胞状态，待细胞贴壁后换液。

3.2. 细胞传代

当细胞密度达到80%-90%时，弃去旧培养基，用PBS润洗细胞1-2次。

加入1 mL胰酶（0.25% Trypsin-0.02% EDTA），37°C消化1-3分钟，显微镜下观察细胞脱落情况。

加入2-3 mL完全培养基终止消化，轻轻吹打细胞形成单细胞悬液。

1000 rpm离心5分钟，弃去上清，加入新鲜培养基重悬细胞。

按1:2至1:4的比例将细胞悬液分至新的培养瓶中，继续培养。

3.3. 细胞冻存

收集对数生长期的细胞，1000 rpm离心5分钟，弃去上清。

用PBS洗涤细胞一次，再次离心后弃去上清。

加入冻存液（90% FBS + 10% DMSO），轻轻混匀细胞悬液。

将细胞分装至冻存管中，标记好信息，放入程序降温盒中，转移至-80°C冰箱过夜。

第二天将冻存管转入液氮罐中长期保存。

4. 注意事项

无菌操作：所有操作需在超净工作台中进行，避免细胞污染。

细胞观察：定期在显微镜下观察细胞形态和生长状态，记录细胞密度和健康状况。

荧光素酶活性检测：在进行活体成像或荧光素酶活性检测前，确保细胞处于良好的生长状态，并按照实验方案加入适量的荧光素底物。

冻存与复苏：冻存细胞时注意降温速度，复苏时快速解冻以提高细胞存活率。

基本操作步骤：

原代培养：取材→分离→培养，需保持材料新鲜及严格无菌2。

传代培养：贴壁细胞需胰酶消化，悬浮细胞可直接传代，离心后重悬分瓶23。

冻存与复苏：使用含10%DMSO的冻存液，程序降温后液氮保存；复苏时快速37℃水浴解冻。

培养操作要点：

基础培养基选择：分为天然培养基、合成培养基（如DMEM、RPMI 1640）和无血清培养基45。目前以合成培养基和无血清培养基使用居多。

培养条件设置：

温度：多数人和哺乳动物细胞为36-37℃，昆虫细胞为27℃。

pH值：多数哺乳动物细胞为7.4，昆虫细胞为6.2。

CO₂浓度：通常维持5-7% CO₂，多数细胞适合5% CO₂气氛。

渗透压：控制在260-320mOsm/kg为宜。

公司正在出售的产品：

具体特点如下：

环境与营养：需无菌环境、精确的温度（36-37℃）和pH（7.2-7.4），动物细胞常需血清，植物细胞需激素。

生长方式：贴壁细胞需表面附着，悬浮细胞自由漂浮，半贴壁半悬浮兼具两者特性。

传代与密度：贴壁细胞需胰酶消化传代，悬浮细胞直接分瓶；密度达80%-90%时需传代，避免营养枯竭与代谢抑制。

敏感性：对剪切应力、污染、温度变化敏感，需定期更换培养液清除代谢物。

应用与局限：便于活细胞观察与实验控制，但体外环境与体内存在差异，长期传代可能导致遗传不稳定与去分化。