人脐静脉融合细胞带绿色荧光；EAhy926/GFP (STR)

产品信息：

人脐静脉融合细胞带绿色荧光EAhy926/GFP是一种通过体细胞杂交技术构建的永生化内皮细胞系，具有贴壁生长特性、表达绿色荧光蛋白，可用于血管生物学、心血管疾病等研究领域的体外模型。

细胞构建背景

该细胞系是通过在聚乙二醇(PEG)胁迫下，将原代培养的人脐静脉细胞与抗硫鸟嘌呤的A549克隆株融合而构建的

融合子在HAT培养基上筛选生长，并以八因子相关抗原进行鉴定

细胞特性特征

形态与生长：表现为上皮细胞样形态，贴壁生长

特异性标志物：电镜可观察到Weibel-Palade小体的细胞质分布，表达Ⅷ因子相关抗原

功能特性：具有分化的内皮细胞特性，可参与血管生成，涉及体内平衡/血栓形成，血压及炎症反应等生理过程

增殖能力：已通过100次以上群体倍增(PDLs)，具有稳定的增殖能力

STR鉴定信息

该细胞系已收录于ATCC等细胞库，保藏编号为CRL-2922

主要STR位点包括：Amelogenin：X；CSF1PO：10,11,12；D13S317：11；D16S539：11,12；D18S51：13,15,17；D19S433：13,14；D21S11：28,29,32；D2S1338：22,24；D3S1358：15,16；D5S818：11；D7S820：8,9,10；D8S1179：13；FGA：22,23；TH01：6,8,9.3；TPOX：8,9；vWA：14,1734

培养操作指南

培养条件

培养基：推荐使用DMEM/F12或高糖DMEM基础培养基，添加10%胎牛血清(FBS)，部分培养体系还需添加1%双抗

培养环境：37℃，5% CO，饱和湿度的培养箱15

复苏与传代操作

复苏步骤：将冻存管在37℃水浴迅速解冻，加入5mL预热培养基混匀，1000RPM离心5分钟弃上清，用新鲜培养基重悬后接种于T25培养瓶

传代时机：当细胞密度达到80%-90%时进行传代

传代方法：

弃去培养上清，用不含钙镁离子的PBS润洗1-2次

加入1-2ml 0.25%胰酶-0.53mM EDTA消化液，37℃消化1-2分钟

显微镜下观察细胞变圆并脱落时，加入完全培养基终止消化

1000RPM离心3-5分钟，弃上清后用新鲜培养基重悬，按1:2至1:4比例传代

冻存技术要点

冻存条件：使用无血清细胞冻存液或完全培养基加5%DMSO，液氮保存

冻存操作：收集对数生长期细胞，离心后用冻存液重悬，调整细胞密度至1×10?～1×10?个/ml，分装至冻存管，采用程序降温盒或逐步降温法后转入液氮保存17

注意事项与应用

操作要点

收到细胞后应先用75%酒精消毒瓶壁，置于37℃培养箱静置2-4小时适应环境

贴壁细胞传代时注意控制消化时间，避免过度胰酶处理影响细胞活性

培养过程中注意无菌操作，所有试剂和耗材均需预先灭菌

培养操作要点：

基础培养基选择：分为天然培养基、合成培养基（如DMEM、RPMI 1640）和无血清培养基45。目前以合成培养基和无血清培养基使用居多。

培养条件设置：

温度：多数人和哺乳动物细胞为36-37℃，昆虫细胞为27℃。

pH值：多数哺乳动物细胞为7.4，昆虫细胞为6.2。

CO₂浓度：通常维持5-7% CO₂，多数细胞适合5% CO₂气氛。

渗透压：控制在260-320mOsm/kg为宜。

功能特点

通过被动运输和主动运输实现物质跨膜转运；以ATP为核心载体，通过线粒体氧化磷酸化或叶绿体光合磷酸化途径供能；通过受体-第二信使-效应器的级联反应模式进行信号转导；原核细胞采用二分裂，真核细胞则通过有丝分裂、减数分裂等方式繁殖；细胞可进行程序性死亡（凋亡），并在多细胞生物中实现分化形成不同组织

注意事项与应用

无菌操作：必须严格无菌无毒，避免微生物污染和不同细胞间交叉污染。

营养需求：需提供氨基酸、维生素、无机盐、促生长因子等，动物细胞还需血清。

抗生素使用：可添加双抗或三抗预防污染，但长期培养不建议持续使用，以防产生耐药性。

细胞培养技术是生物医学研究的基础工具，可用于细胞生理代谢、药物筛选、疫苗生产等研究。不同细胞系的具体培养条件需参考相关文献或实验经验调整。

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