稳定表达EBNA1的人胚肾细胞；293E (STR)

                                                           稳定表达EBNA1的人胚肾细胞；293E (STR)
产品信息：

稳定表达EBNA1的人胚肾细胞（293E）是一种常用的哺乳动物表达系统，广泛应用于重组蛋白表达和病毒包装等领域。以下是其详细说明、培养操作和特性：

细胞特性

来源：293E细胞源自人胚肾细胞系HEK293，通过基因工程手段稳定表达EB病毒核抗原1（EBNA1）。

形态：上皮细胞样，呈多角形，贴壁生长。

生长特性：快速增殖，倍增时间约24-30小时，适合大规模培养和蛋白表达。

EBNA1功能：EBNA1蛋白能够促进游离DNA的核转移，提高增强子活性，从而促进蛋白产生。

2. 培养操作

2.1. 培养基配置

基础培养基：通常使用IsCOe's Modified DulbecCOs Medium（IMDM）。

补充成分：添加10%胎牛血清（FBS）和1%青霉素/链霉素混合液（双抗）。

2.2. 培养条件

温度与气体环境：37℃，5% CO，95%空气。

换液频率：每2-3天更换一次新鲜培养基，或根据细胞密度和培养基颜色变化及时更换。

2.3. 细胞传代

传代比例：当细胞密度达到80%-90%时进行传代，推荐1:3至1:4的比例。

消化方法：使用0.25%胰蛋白酶-0.02% EDTA溶液消化细胞，显微镜下观察细胞变圆并开始脱落时，加入含血清培养基终止消化。

离心与重悬：将消化后的细胞悬液收集到离心管中，1000 rpm离心5分钟，弃去上清液，用新鲜培养基重悬细胞沉淀。

分瓶培养：将细胞悬液按适当比例分配到新的培养瓶中，补加适量新鲜培养基，轻轻混匀后放入培养箱继续培养。

2.4. 细胞冻存与复苏

冻存液配方：90%胎牛血清+10%DMSO，现用现配。

冻存步骤：收集对数生长期细胞，计数后调整细胞密度至(1-5)×1:0^6个/mL，加入冻存液混匀，分装至冻存管中，标记好信息。将冻存管置于程序降温盒中，先放-80℃冰箱过夜，然后转入液氮罐中长期保存。

复苏步骤：从液氮罐中取出冻存管，迅速放入37℃水浴中摇晃解冻。用75%酒精擦拭冻存管外壁后，将细胞悬液转移至含有预热培养基的离心管中，1000 rpm离心5分钟，弃去上清液，用新鲜培养基重悬细胞沉淀。将细胞悬液接种到培养瓶中，放入培养箱中培养，次日更换新鲜培养基。

3. 注意事项

无菌操作：整个操作过程需在超净工作台中进行，严格遵守无菌操作规范，避免细胞污染6

细胞状态观察：定期在显微镜下观察细胞形态和生长状态，记录细胞密度和健康状况，及时处理异常情况。

培养基选择：确保使用新鲜配制的培养基，避免使用运输用的灌液培养基继续培养细胞。

冻存与复苏技巧：冻存时采用程序降温法可提高细胞存活率；复苏时快速解冻并立即加入培养基可减少细胞损伤。

细胞类型与特性：

原代细胞：直接从组织中分离的细胞，通常指第1-10代细胞，具有接近体内状态的特性。

细胞系：原代细胞首次传代成功后形成的细胞群，可连续传代。

细胞株：从原代培养或细胞系中获得的具有特殊性质的细胞，通常为第10-50代。

根据生长方式分为：

贴壁细胞：需附着在培养瓶表面生长，如成纤维细胞、上皮细胞。

悬浮细胞：在培养基中自由悬浮生长，如血液细胞。

半贴壁半悬浮细胞：兼具贴壁和悬浮生长特性。

特殊细胞的生物特性举例：

成纤维细胞：具丰富粗面内质网、高尔基体，能合成胶原纤维、弹性纤维及有机基质；在外伤刺激下可恢复幼稚状态，参与组织修复。

肿瘤细胞：具无限增殖、贴壁依赖或悬浮生长、易转化等特性，常用于药物筛选与癌变机制研究。

神经干细胞：具多向分化潜能（可分化为神经元、星形胶质细胞等），增殖能力强，在体外培养中可形成克隆球。

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注意事项与应用：

无菌操作：必须严格无菌无毒，避免微生物污染和不同细胞间交叉污染。

营养需求：需提供氨基酸、维生素、无机盐、促生长因子等，动物细胞还需血清。

抗生素使用：可添加双抗或三抗预防污染，但长期培养不建议持续使用，以防产生耐药性。

细胞培养技术是生物医学研究的基础工具，可用于细胞生理代谢、药物筛选、疫苗生产等研究。不同细胞系的具体培养条件需参考相关文献或实验经验调整。