人结直肠腺癌细胞长春新碱耐药株；HCT-8/V (STR)

                                                           人结直肠腺癌细胞长春新碱耐药株；HCT-8/V (STR)
产品信息：

HCT-8/V 是一种人结直肠腺癌细胞长春新碱耐药株，常用于癌症耐药性研究。以下是其详细说明、培养操作和特性：

细胞概述

来源：HCT-8/V 细胞系是由人结直肠腺癌细胞株 HCT-8 经过长春新碱诱导产生的耐药细胞株

形态：上皮细胞样，贴壁生长。

特性：该细胞株对长春新碱具有高度耐药性，并且对其他多种化疗药物也表现出交叉耐药性，是研究肿瘤多药耐药性（MDR）机制的重要模型

2. 培养条件

培养基：推荐使用 RPMI 1640 培养基，添加 10% 胎牛血清（FBS）和 1% 双抗（青霉素和链霉素）

培养环境：37°C，5% CO，饱和湿度。

耐药维持：培养体系中需加入终浓度为 2000 ng/mL 长春新碱以维持耐药性。

3. 细胞操作

3.1. 复苏

从液氮中取出冻存管，迅速放入 37°C 水浴中解冻。

将细胞悬液转移至含有完全培养基的离心管中，离心后弃去上清液。

用新鲜培养基重悬细胞，转移至培养瓶中，放入培养箱中培养

3.2. 传代

当细胞密度达到 80%-90% 时，弃去旧培养基，用 PBS 润洗细胞。

加入胰蛋白酶消化细胞，显微镜下观察细胞变圆后，加入完全培养基终止消化。

离心后重悬细胞，按 1:2 至 1:4 的比例分瓶培养。

3.3. 冻存

细胞密度达到 80%-90% 时，用胰蛋白酶消化细胞。

离心后弃去上清液，用无血清冻存液（如 90% FBS + 10% DMSO）重悬细胞。

分装至冻存管中，逐步降温后放入液氮中保存。

4. 细胞特性

生长特性：HCT-8/V 细胞生长较快，贴壁生长，形态呈上皮细胞样。

耐药性：对长春新碱具有高度耐药性，耐药倍数可达 20 倍以上，并且对其他化疗药物如 5-氟尿嘧啶、顺铂等也表现出交叉耐药性。

分子特征：通常表现出 P-糖蛋白（P-gp）高表达，这是多药耐药性的一个重要机制

基本操作步骤：

原代培养：取材→分离→培养，需保持材料新鲜及严格无菌2。

传代培养：贴壁细胞需胰酶消化，悬浮细胞可直接传代，离心后重悬分瓶23。

冻存与复苏：使用含10%DMSO的冻存液，程序降温后液氮保存；复苏时快速37℃水浴解冻。

培养操作要点：

基础培养基选择：分为天然培养基、合成培养基（如DMEM、RPMI 1640）和无血清培养基45。目前以合成培养基和无血清培养基使用居多。

培养条件设置：

温度：多数人和哺乳动物细胞为36-37℃，昆虫细胞为27℃。

pH值：多数哺乳动物细胞为7.4，昆虫细胞为6.2。

CO₂浓度：通常维持5-7% CO₂，多数细胞适合5% CO₂气氛。

渗透压：控制在260-320mOsm/kg为宜。

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具体特点如下：

环境与营养：需无菌环境、精确的温度（36-37℃）和pH（7.2-7.4），动物细胞常需血清，植物细胞需激素。

生长方式：贴壁细胞需表面附着，悬浮细胞自由漂浮，半贴壁半悬浮兼具两者特性。

传代与密度：贴壁细胞需胰酶消化传代，悬浮细胞直接分瓶；密度达80%-90%时需传代，避免营养枯竭与代谢抑制。

敏感性：对剪切应力、污染、温度变化敏感，需定期更换培养液清除代谢物。

应用与局限：便于活细胞观察与实验控制，但体外环境与体内存在差异，长期传代可能导致遗传不稳定与去分化。