人肺癌细胞/5Fu耐药株；A549-5Fu (STR)

产品信息：

人肺癌细胞/5Fu耐药株（A549-5Fu）是一种对5-氟尿嘧啶（5-Fu）具有耐药性的人肺癌细胞系，常用于癌症耐药性机制研究。以下是其详细说明、培养操作和特性：

细胞特性

来源：A549-5Fu细胞系源自人肺腺癌细胞系A549，经过长期暴露于5-Fu诱导产生耐药性。

形态：上皮细胞样，贴壁生长。

耐药性：对5-Fu具有显著耐药性，常用于研究化疗耐药机制。

STR鉴定：通过STR鉴定确认细胞身份，避免交叉污染。

2. 培养操作

2.1. 培养基配置

基础培养基：通常使用McCO's 5A培养基。

补充成分：添加10%胎牛血清（FBS）和1%青霉素/链霉素混合液（双抗）。

2.2. 培养条件

温度与气体环境：37℃，5% CO，95%空气。

换液频率：每2-3天更换一次新鲜培养基，或根据细胞密度和培养基颜色变化及时更换。

2.3. 细胞传代

传代比例：当细胞密度达到80%-90%时进行传代，推荐1:2至1:3的比例。

消化方法：使用0.25%胰蛋白酶-0.02% EDTA溶液消化细胞，显微镜下观察细胞变圆并开始脱落时，加入含血清培养基终止消化。

离心与重悬：将消化后的细胞悬液收集到离心管中，1000 rpm离心5分钟，弃去上清液，用新鲜培养基重悬细胞沉淀。

分瓶培养：将细胞悬液按适当比例分配到新的培养瓶中，补加适量新鲜培养基，轻轻混匀后放入培养箱继续培养。

2.4. 细胞冻存与复苏

冻存液配方：90%胎牛血清+10%DMSO，现用现配。

冻存步骤：收集对数生长期细胞，计数后调整细胞密度至(1-5)×10^6个/mL，加入冻存液混匀，分装至冻存管中，标记好信息。将冻存管置于程序降温盒中，先放-80℃冰箱过夜，然后转入液氮罐中长期保存。

复苏步骤：从液氮罐中取出冻存管，迅速放入37℃水浴中摇晃解冻。用75%酒精擦拭冻存管外壁后，将细胞悬液转移至含有预热培养基的离心管中，1000 rpm离心5分钟，弃去上清液，用新鲜培养基重悬细胞沉淀。将细胞悬液接种到培养瓶中，放入培养箱中培养，次日更换新鲜培养基。

3. 注意事项

无菌操作：整个操作过程需在超净工作台中进行，严格遵守无菌操作规范，避免细胞污染。

细胞状态观察：定期在显微镜下观察细胞形态和生长状态，记录细胞密度和健康状况，及时处理异常情况。

培养基选择：确保使用新鲜配制的培养基，避免使用运输用的灌液培养基继续培养细胞。

冻存与复苏技巧：冻存时采用程序降温法可提高细胞存活率；复苏时快速解冻并立即加入培养基可减少细胞损伤。

细胞类型与特性：

原代细胞：直接从组织中分离的细胞，通常指第1-10代细胞，具有接近体内状态的特性。

细胞系：原代细胞首次传代成功后形成的细胞群，可连续传代。

细胞株：从原代培养或细胞系中获得的具有特殊性质的细胞，通常为第10-50代。

根据生长方式分为：

贴壁细胞：需附着在培养瓶表面生长，如成纤维细胞、上皮细胞。

悬浮细胞：在培养基中自由悬浮生长，如血液细胞。

半贴壁半悬浮细胞：兼具贴壁和悬浮生长特性。

功能特点

通过被动运输和主动运输实现物质跨膜转运；以ATP为核心载体，通过线粒体氧化磷酸化或叶绿体光合磷酸化途径供能；通过受体-第二信使-效应器的级联反应模式进行信号转导；原核细胞采用二分裂，真核细胞则通过有丝分裂、减数分裂等方式繁殖；细胞可进行程序性死亡（凋亡），并在多细胞生物中实现分化形成不同组织

不同类型细胞的特异性（生物特性差异）

形态多样性：细胞形态因功能而异，如成纤维细胞呈梭形或多角形，神经细胞有突起，上皮细胞呈多边形紧密排列；细菌细胞多为球形、杆状或螺旋形。

功能特异性：动物细胞依赖线粒体供能，植物细胞具叶绿体进行光合作用；原核细胞（如细菌）无细胞核，真核细胞（如动植物细胞）有核膜包裹的核；某些细胞如酵母细胞可进行出芽生殖，哺乳动物细胞则通过有丝分裂增殖。

生长特性：贴壁细胞需附着表面生长（如成纤维细胞），悬浮细胞可在培养液中自由生长（如血液细胞）；不同细胞分裂速度各异，如肿瘤细胞增殖较快，正常体细胞分裂较慢。

特殊细胞的生物特性举例

成纤维细胞：具丰富粗面内质网、高尔基体，能合成胶原纤维、弹性纤维及有机基质；在外伤刺激下可恢复幼稚状态，参与组织修复。

肿瘤细胞：具无限增殖、贴壁依赖或悬浮生长、易转化等特性，常用于药物筛选与癌变机制研究。

神经干细胞：具多向分化潜能（可分化为神经元、星形胶质细胞等），增殖能力强，在体外培养中可形成克隆球。

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