人甲状腺癌细胞 ；KHM-5M (STR)

                                                           人甲状腺癌细胞 ；KHM-5M (STR)
产品信息：

KHM-5M细胞是一种人甲状腺未分化癌（间变性甲状腺癌，ATC）细胞系，具有独特的生物学特性，常用于癌症研究。

细胞特性

种属与组织来源：人源，甲状腺未分化癌组织，取自胸腔积液。

形态与生长：成纤维细胞样，贴壁生长。

遗传特征：STR鉴定明确，携带特定基因突变，大量产生中性粒细胞趋化因子（如IL-8和GM-CSF）。

应用领域：研究肿瘤微环境、免疫反应、细胞因子作用机制及药物筛选等。

生物安全等级：1级。

培养条件与操作

培养基：RPMI-1640培养基+10%胎牛血清（FBS）+1%双抗，37℃，5% CO₂。

复苏：

冻存管37℃水浴快速解冻，加入5mL预热完全培养基混匀。

1000rpm离心5分钟，弃上清后用新鲜培养基重悬细胞。

接种至T25培养瓶，补充6-8mL培养基，37℃培养过夜。

传代：

细胞密度达80%-90%时进行传代。

弃旧培养基，PBS润洗1-2次，加入1-2mL 0.25%胰酶-EDTA溶液，37℃消化1-2分钟（镜下观察细胞变圆脱落）。

加完全培养基终止消化，轻轻吹打制成单细胞悬液。

离心收集细胞后按1:2至1:4比例分瓶，补充新鲜培养基继续培养。

冻存：

细胞生长良好时收集，离心后弃上清。

用无血清冻存液（或90%FBS+10%DMSO）重悬细胞，调整密度至1×10⁶/mL以上。

分装冻存管，使用程序降温盒逐步降温（先置于-20℃1.5小时，再转入-80℃冰箱），24小时后可转入液氮罐长期保存。

注意事项

无菌操作：全程严格无菌操作，避免污染。

细胞状态监控：定期在显微镜下观察细胞形态和密度，及时换液和传代。

运输与保存：细胞运输过程中注意温度控制，收到细胞后尽快复苏培养，避免长时间放置。

基本操作步骤：

原代培养：取材→分离→培养，需保持材料新鲜及严格无菌2。

传代培养：贴壁细胞需胰酶消化，悬浮细胞可直接传代，离心后重悬分瓶23。

冻存与复苏：使用含10%DMSO的冻存液，程序降温后液氮保存；复苏时快速37℃水浴解冻。

培养操作要点：

基础培养基选择：分为天然培养基、合成培养基（如DMEM、RPMI 1640）和无血清培养基45。目前以合成培养基和无血清培养基使用居多。

培养条件设置：

温度：多数人和哺乳动物细胞为36-37℃，昆虫细胞为27℃。

pH值：多数哺乳动物细胞为7.4，昆虫细胞为6.2。

CO₂浓度：通常维持5-7% CO₂，多数细胞适合5% CO₂气氛。

渗透压：控制在260-320mOsm/kg为宜。

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具体特点如下：

环境与营养：需无菌环境、精确的温度（36-37℃）和pH（7.2-7.4），动物细胞常需血清，植物细胞需激素。

生长方式：贴壁细胞需表面附着，悬浮细胞自由漂浮，半贴壁半悬浮兼具两者特性。

传代与密度：贴壁细胞需胰酶消化传代，悬浮细胞直接分瓶；密度达80%-90%时需传代，避免营养枯竭与代谢抑制。

敏感性：对剪切应力、污染、温度变化敏感，需定期更换培养液清除代谢物。

应用与局限：便于活细胞观察与实验控制，但体外环境与体内存在差异，长期传代可能导致遗传不稳定与去分化。