金黄色葡萄球菌(SA)检测试剂盒(荧光PCR法) 新品

金黄色葡萄球菌(SA)检测试剂盒(荧光PCR法)

检测目的与重要性

检测目标： 金黄色葡萄球菌。这是一种常见的食源性致病菌和重要的临床感染病原体。

重要性：

食品安全： 金黄色葡萄球菌是引起细菌性食物中毒的主要原因之一。其在食物中繁殖产生的肠毒素 是导致急性肠胃炎的元凶。

对食品、食品加工环境及从业人员进行SA检测是食品安全监控的关键环节。

临床诊断： SA是医院和社区获得性感染（如皮肤软组织感染、肺炎、败血症、心内膜炎等）的常见病原体。

快速诊断对于指导临床用药（尤其是区分甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌MSSA和耐甲氧西林金黄色葡萄球菌MRSA）至关重要。

流行病学调查： 对医院或社区感染的爆发进行溯源调查。

药效评估： 高灵敏度的荧光PCR法也常用于评估抗菌药物对SA的杀菌效果（如最小抑菌浓度MIC测定中的细菌负荷量化）。

二、 方法学原理：实时荧光定量PCR（qPCR）

该技术的核心是针对金黄色葡萄球菌特有的保守基因序列进行特异性扩增和实时检测。

特异性靶基因： 试剂盒设计的引物和探针通常靶向SA独有的基因序列，例如：

nuc基因： 编码热稳定核酸酶，是鉴定SA最常用的特异性靶标。

femA/B基因： 参与细胞壁合成，也是SA的特异性标志。

coa基因： 编码凝固酶。

TaqMan探针技术（最常用）：

PCR扩增： 在PCR热循环（变性-退火-延伸）过程中，特异性引物与SA的DNA模板结合并进行扩增。

荧光信号释放： 体系中同时存在一个特异性荧光探针，其5‘端带有一个报告荧光基团（R），3’端带有一个淬灭荧光基团（Q）。当探针完整时，Q基团会抑制R基团的荧光发射。

信号检测： 在PCR延伸阶段，Taq酶的5‘→3’外切酶活性会切割与模板结合的探针，使R基团与Q基团分离，从而释放出荧光信号。

实时定量： 每完成一次扩增循环，就有一批探针被水解，荧光信号随之增强。仪器实时监测荧光强度的变化。样本中初始的SA模板越多，荧光信号达到设定阈值所需的循环数（Ct值）就越早。

三、 试剂盒典型组成

一个典型的SA荧光PCR检测试剂盒通常包含：

PCR反应液： 含有耐热的DNA聚合酶（如Taq酶）、dNTPs、Mg2?、缓冲液等。

SA引物探针混合液： 包含针对SA特异性基因（如nuc基因）设计的引物和荧光探针。

内标（Internal Control）： 用于监控提取过程、PCR抑制物是否存在以及反应体系是否正常。内标通常与目标SA同时在一个反应管内进行扩增，但使用不同的荧光通道（如VIC/HEX）进行检测。

阳性对照： 含有灭活的金黄色葡萄球菌菌株DNA或含有靶基因序列的质粒。

阴性对照： 无核酸酶水。

DNA提取试剂（可能单独提供）： 用于从样本（食品增菌液、临床标本等）中提取纯化DNA。

四、 检测流程

样本前处理：

样本类型： 食品、环境拭子、临床标本（脓液、痰液、血液培养物等）。

增菌培养（通常需要）： 为提高检测灵敏度，尤其是当样本中菌量较低时，通常需要进行一定时间的增菌培养（如在含7.5%氯化钠的肉汤中培养18-24小时）。

DNA模板制备：

取少量增菌液或原始样本，使用试剂盒配套或通用的DNA提取试剂盒提取总基因组DNA。提取质量直接影响检测结果。

反应体系配制：

在无菌PCR反应管中，按说明书比例加入PCR反应液、引物探针混合液、内标和提取的DNA模板。轻柔混匀，短暂离心。

上机扩增：

将反应管放入实时荧光定量PCR仪。

设置扩增程序：通常包括预变性（95℃， 2-5分钟），然后进行40-45个循环的扩增（每个循环包括95℃变性10-15秒，60℃退火/延伸30-60秒，在此阶段采集荧光信号）。

设置荧光通道：FAM通道用于检测SA，VIC/HEX通道用于检测内标。

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