金鱼造血器官坏死病毒（GFHNV）检测试剂盒（荧光PCR法）

金鱼造血器官坏死病毒（GFHNV）检测试剂盒（荧光PCR法）

简介：

金鱼造血器官坏死病毒检测试剂盒（荧光PCR法） 是一种基于实时荧光定量PCR技术的体外诊断试剂盒，

用于定性检测金鱼、鲫鱼等相关鱼类的组织样本（如肾、脾、肝等）或水体环境样本中金鱼造血器官坏死病毒（GFHNV）的特异性核酸。

目标病原体：金鱼造血器官坏死病毒，也称为鲫鱼造血器官坏死病毒（CHNV）。它属于虹彩病毒科（Iridoviridae），是一种大型双链DNA病毒。

所致疾病：主要引起金鱼造血器官坏死病，也称为鲫鱼造血器官坏死病。该病主要危害金鱼、鲫鱼及其杂交品种（如锦鲤），尤其对鱼苗和幼鱼危害巨大，死亡率可高达80%-100%。

病理特征：病毒主要侵袭鱼的肾、脾等造血器官和肝、胰等组织，导致器官坏死、功能衰竭，从而引起死亡。

二、 检测的重要性与用途

疾病确诊：快速、准确地鉴别病因，将GFHNV感染与其他有相似症状（如嗜睡、厌食、体色发黑）的细菌性疾病或寄生虫病区分开来。

早期预警与检疫：

引种检疫：对新引进的鱼群进行检测，防止带入病毒，是养殖场最重要的生物安全措施之一。

无症状筛查：感染初期或携带病毒的鱼可能不显示症状，通过定期检测可早期发现病毒，及时隔离和处理，避免疫情爆发。

疫情监测与净化：用于暴发疾病的鱼群诊断，确认病原，并监测消毒和防控措施的效果，最终实现鱼群的净化和健康管理。

科研与流行病学调查：用于研究病毒的分布、变异和传播规律。

三、 检测原理（荧光PCR法）

该方法是目前最灵敏、最特异的病毒检测方法之一。

DNA提取：从鱼的组织样本（优先采集肾和脾）或水体沉淀物DNA中提取总DNA，其中包含可能存在的病毒DNA。

PCR扩增：将提取的DNA与试剂盒内提供的特异性引物、荧光探针、PCR反应液等混合。

引物：是两段短的单链DNA片段，能特异性地与GFHNV基因组上的保守区域结合。

TaqMan探针：是一段带有一个荧光报告基团（R） 和一个荧光淬灭基团（Q） 的特异性寡核苷酸探针。当探针完整时，报告基团发出的荧光被淬灭基团吸收，仪器检测不到信号。

荧光信号产生：在PCR扩增过程中，Taq DNA酶在延伸链时会发挥5‘→3’外切酶活性，将探针水解切割，使报告基团与淬灭基团分离。此时，报告基团发出荧光信号。

实时监测与结果判定：实时荧光PCR仪会监测每个PCR循环结束时的荧光信号强度。

阳性样本：如果样本中含有GFHNV DNA，则会进行特异性扩增，荧光信号随着循环数的增加而累积。当信号强度超过预先设定的阈值（Threshold） 时，所对应的循环数称为Ct值。Ct值越小，代表起始模板中的病毒含量越高。

阴性样本：如果样本中不含病毒DNA，则不会发生特异性扩增，荧光信号始终无法超过阈值。

四、 样本类型与采集

最佳样本：

肾组织、脾组织：病毒主要侵袭的靶器官，病毒载量最高，是首选的检测样本。

肝组织：也是病毒增殖的重要器官。

其他样本：

全鱼（鱼苗）：对于非常小的鱼苗，可采集整条鱼。

水体或底泥：用于环境监测，但病毒含量较低，需进行富集处理。

采集注意事项：

取样应遵循无菌原则，避免交叉污染。

样本应冷藏保存并及时送检，若超过48小时，应于-20℃或-80℃冷冻保存。

五、 结果解读

阳性（+）：检测到典型的“S”型扩增曲线，且Ct值小于或等于试剂盒说明书规定的判定值（如Ct ≤ 35）。表明样本中含有金鱼造血器官坏死病毒核酸。

阴性（-）：无扩增曲线或Ct值大于判定值。表明在本次检测中，未检测到金鱼造血器官坏死病毒核酸。

无效：试剂盒的内标（Internal Control）未正常扩增，表明本次检测过程可能存在问题（如PCR抑制物干扰、操作失误），结果无效，需重新检测。

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