莫氏立克次体（RM）检测试剂盒（荧光PCR法）

商品属性：

一、 概述与临床意义

莫氏立克次体 是引起地方性斑疹伤寒（也称鼠型斑疹伤寒）的病原体。该病主要通过鼠蚤在鼠群间传播，人类通常是通过被感染的蚤粪污染皮肤破损处或通过呼吸吸入而感染。

其临床症状与流行性斑疹伤寒相似（如发热、头痛、皮疹等），但通常较轻。

荧光PCR法检测试剂盒 是一种基于聚合酶链式反应（PCR）和荧光探针技术的分子诊断产品。它具有以下核心价值：

早期快速诊断： 能够在感染早期（发热初期）检测出病原体的核酸，远早于血清学抗体产生的时间（通常需要5-7天后），为早期治疗提供关键依据。

高灵敏度与特异性： 能够检测出极低拷贝数的莫氏立克次体DNA，并有效避免与其他病原体（如普氏立克次体）发生交叉反应，结果准确可靠。

定量/半定量能力： 部分试剂盒可通过标准曲线对病原体核酸进行定量，辅助判断感染严重程度或治疗效果。

自动化与安全性： 整个检测过程可在封闭管内进行，大大降低了扩增产物污染的风险，且易于实现自动化操作，提高检测效率。

二、 检测原理

该试剂盒基于 TaqMan 荧光探针法，其工作原理如下：

核酸提取： 首先从患者样本（如全血、血清、组织液或痂皮）中提取出总核酸（DNA和RNA），纯化并富集莫氏立次克体DNA。

PCR扩增： 将提取的DNA与试剂盒内的反应液混合。反应液中包含：

特异性引物： 设计与莫氏立克次体独有的保守基因序列（如外膜蛋白基因 ompB、gltA 基因等）互补的引物，确保扩增的特异性。

特异性荧光探针： 一条与靶DNA序列内部结合的寡核苷酸探针，其两端分别标记有报告荧光基团（如FAM） 和淬灭荧光基团。当两者距离很近时，报告基团的荧光被淬灭基团吸收，仪器检测不到荧光信号。

荧光信号产生： 在PCR扩增的延伸阶段，Taq DNA聚合酶发挥5‘→3’外切核酸酶活性，将结合在靶DNA上的探针水解切割，使报告基团与淬灭基团分离。此时，报告基团发出荧光信号。

信号检测： 实时荧光PCR仪在每一轮循环结束后检测荧光信号的强度。每完成一次扩增，靶DNA片段数量增加一倍，释放的荧光信号也相应增强。

结果判读： 仪器软件实时监测荧光信号的增长。当荧光信号超过预先设定的阈值（背景噪声水平）时，所对应的PCR循环数称为Ct值（循环阈值）。

Ct值越小，代表样本中起始的莫氏立克次体DNA浓度越高（因为很早就达到检测阈值）。

Ct值越大，代表起始DNA浓度越低或不存在。

如果荧光信号始终不增长，则判定为阴性。

三、 试剂盒组成

一个典型的试剂盒通常包含以下核心组分：

RM PCR反应液： 含有缓冲液、dNTPs、Mg2?等。

酶混合物： 包含热启动Taq DNA聚合酶。

莫氏立克次体阳性对照： 含有已知浓度的莫氏立克次体特定DNA片段，用于验证整个实验过程是否成功。

阴性对照： 不含莫氏立克次体DNA的溶液（如无核酸水），用于监控是否存在污染。

内标（Internal Control， IC）： （部分高端试剂盒包含）用于监控从核酸提取到PCR扩增的每一步是否正常，防止假阴性结果。内标通常与靶基因在同一反应管内同时扩增，但使用不同颜色的荧光基团（如VIC/HEX）标记。

四、 操作步骤简介

样本采集与处理： 无菌采集患者EDTA抗凝全血或血清样本，按要求储存和运输。

核酸提取： 使用商业化的核酸提取试剂盒或自动化提取仪，严格按照说明书操作，得到纯化的DNA。

反应体系配制： 在无菌PCR管或96孔板中，按比例混合PCR反应液、酶、引物探针混合物、提取的样本DNA/阳性对照/阴性对照。此步骤需在超净工作台或生物安全柜中进行，防止污染。

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