人上皮性钙黏附蛋白ELISA试剂盒

产品概述

本试剂盒采用双抗体夹心酶联免疫吸附法（ELISA），用于定量检测人血清、血浆、组织匀浆液、细胞培养上清液或尿液等样本中的上皮性钙黏附蛋白（CDHE/E-cadherin）含量。具有高灵敏度、高特异性和稳定的重复性，适用于科研实验。

试剂盒组成

预包被微孔板：96孔或48孔（根据规格选择），包被抗CDHE抗体。

标准品：浓度梯度冻干粉或溶液，用于标准曲线绘制。

检测抗体：HRP标记的抗CDHE抗体。

显色底物（TMB）：辣根过氧化物酶（HRP）催化底物。

终止液：酸性溶液，终止显色反应。

洗涤缓冲液：20×浓缩液，需稀释后使用。

封板膜：用于温育时密封微孔板。

检测原理

固相抗体结合：样本中的CDHE与预包被在微孔板上的抗体结合。

酶标抗体反应：加入HRP标记的检测抗体，形成“抗体-抗原-酶标抗体”复合物。

显色反应：加入TMB底物后，HRP催化显色，颜色深浅与CDHE浓度成正比。

终止与检测：加入终止液后，在450nm波长下测定吸光度（OD值）。

操作步骤

试剂准备：所有试剂平衡至室温（20-25℃），洗涤缓冲液按比例稀释。

加样：

标准品孔：加入不同浓度标准品50μL。

样本孔：加入待测样本50μL（建议复孔检测）。

空白孔：仅加洗涤液。

孵育：37℃温育60分钟，洗涤5次。

加酶标抗体：每孔加入HRP标记抗体100μL，37℃孵育60分钟，洗涤5次。

显色：每孔加TMB底物90μL，避光反应15-30分钟（显蓝色）。

终止：加入终止液50μL，溶液变黄色。

检测：15分钟内于450nm波长读取OD值（建议使用双波长校正，参考630nm）。

注意事项

样本处理：避免反复冻融；溶血、脂血或浑浊样本需离心后取上清。

温育控制：加样时间不超过10分钟，避免孔间预温育时间差异。

洗涤：充分拍干液体，避免交叉污染。

储存：未使用的板条密封保存于4℃，试剂按说明书要求存放（部分需-20℃）。

技术参数

检测范围：通常为0.156-10ng/mL（具体以标准曲线为准）。

灵敏度：≤0.1ng/mL。

样本体积：50-100μL。

反应时间：总时长约2.5小时（含孵育和显色）。

运输与保存：2-8℃低温运输，有效期6-12个月。

结果计算

以标准品浓度为横坐标、OD值为纵坐标绘制标准曲线，通过四参数拟合方程计算样本浓度。

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