兔白介素4(IL-4)ELISA试剂盒

商品属性

产品概述

本试剂盒采用双抗体夹心酶联免疫吸附法（ELISA）定量检测兔血清、血浆或细胞培养上清液中的白介素4（IL-4）。适用于科研实验，不用于临床诊断。

检测原理

包被：微孔板预包被抗兔IL-4抗体。

结合反应：样本中的IL-4与生物素标记的检测抗体特异性结合，形成“抗体-抗原-标记抗体”复合物。

信号放大：加入链霉亲和素-HRP（辣根过氧化物酶）与生物素结合，洗涤后去除未结合物。

显色：加入底物TMB（A/B液），在HRP催化下产生颜色反应，颜色深度与IL-4浓度成正比。

终止与检测：加入终止液后，用酶标仪在450 nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样本浓度。

试剂盒组分

| 组分名称 | 96T配置 | 48T配置 | 保存条件（2–8℃） |

| 预包被微孔板 | 1块（96孔） | 半块（48孔） | 即用型 |

| IL-4标准品（400 ng/mL）| 0.6 mL | 0.3 mL | 需稀释 |

| 生物素标记抗IL-4抗体 | 6 mL | 3 mL | 即用型 |

| 链霉亲和素-HRP | 10 mL | 5 mL | 即用型 |

| 洗涤缓冲液（20×） | 20 mL | 10 mL | 按说明书稀释 |

| TMB底物（A/B液） | 各5 mL | 各2.5 mL | 避光保存 |

| 终止液 | 5 mL | 2.5 mL | 即用型 |

样本要求

血清/血浆：采集后离心去除颗粒物，-20℃保存，避免反复冻融。

细胞上清液：离心去除沉淀，稀释后检测（建议预实验确定稀释倍数）。

操作步骤

标准品稀释：用标准品稀释缓冲液配制梯度浓度（400 ng/mL起始，按说明书倍比稀释）。

加样：每孔加入标准品或样本100 μL，37℃孵育90分钟。

洗涤：弃液后，用1×洗涤缓冲液洗板3次。

加检测抗体：每孔加入生物素标记抗体100 μL，37℃孵育60分钟，再次洗涤。

加酶结合物：每孔加入链霉亲和素-HRP 100 μL，37℃避光孵育30分钟，洗涤。

显色：加入TMB底物各50 μL，避光反应15–30分钟。

终止：每孔加入终止液50 μL，立即测定OD450值。

结果计算

以标准品浓度为横坐标，OD值为纵坐标，绘制标准曲线（推荐四参数拟合）。

根据样本OD值从曲线中计算浓度，若样本被稀释，需乘以稀释倍数。

注意事项

试剂使用前平衡至室温，避免反复冻融标准品。

严格控制孵育时间和温度，洗涤时避免孔间交叉污染。

终止后30分钟内完成检测，避免显色过深影响准确性。

性能参数

灵敏度：≤1.0 ng/mL

检测范围：5–400 ng/mL

特异性：不与兔其他细胞因子交叉反应。

有效期

12个月（见外包装标签）。

公司出售的产品