大鼠补体成分4(C4)ELISA试剂盒

检测原理

采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。预先包被抗大鼠C4抗体的微孔板中依次加入样本、标准品及HRP标记检测抗体，经温育洗涤后，通过TMB显色系统催化产生颜色反应，颜色深度与样本中C4浓度呈正相关。最终在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算浓度。

技术参数

检测范围：0.5–16 μmol/L（具体以实际标准品梯度为准）

灵敏度：最低检测浓度<0.1 μmol/L

特异性：不与其它可溶性结构类似物交叉反应

重复性：板内变异系数<10%，板间变异系数<15%

有效期：6个月（生产日期见包装标签）

保存条件：2–8℃避光保存，避免反复冻融

试剂盒组成

| 组分名称 | 96孔配置 | 48孔配置 |

| 包被微孔板 | 12孔×8条 | 12孔×4条 |

| 标准品（S0-S5） | 0.3mL×6管 | 0.3mL×6管 |

| HRP标记检测抗体 | 10mL | 5mL |

| 底物A/B | 各6mL | 各3mL |

| 终止液 | 6mL | 3mL |

| 20×洗涤缓冲液 | 25mL | 15mL |

样本要求

适用样本：血清、血浆、组织匀浆液、细胞上清液等

样本体积：50–100μL/孔

样本处理：避免溶血或反复冻融，2–8℃短期保存，长期需-20℃以下冻存

操作步骤

平衡与加样：

微孔板室温平衡20分钟，设置标准品孔、样本孔及空白孔。

标准品孔加入梯度浓度标准品50μL，样本孔加入待测样本50μL。

孵育：

每孔加入HRP标记抗体100μL，37℃孵育60分钟。

洗涤：

弃液后拍干，每孔加满1×洗涤液（350μL），静置1分钟，重复5次。

显色与终止：

每孔加入底物A/B各50μL，37℃避光孵育15分钟。

加入终止液50μL，15分钟内测定450nm OD值。

注意事项

实验前需将所有试剂平衡至室温，避免产生冷凝水。

洗涤过程需彻底，避免残留影响结果。

若样本浓度超出检测范围，建议稀释后复测。

质量控制

建议每次实验设置复孔，取平均值计算。

标准曲线R²值应≥0.99，否则需重复实验。

应用范围

本试剂盒仅限科研使用，不适用于临床诊断。

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