小鼠基质金属蛋白酶10(MMP-10)ELISA试剂盒

商品属性

预期用途

本试剂盒采用双抗体夹心酶联免疫吸附法（ELISA），定量检测小鼠血清、血浆、细胞培养上清液或其他生物液体中的MMP-10含量，适用于科研用途，不用于临床诊断。

实验原理

试剂盒以抗小鼠MMP-10抗体预包被微孔板，形成固相载体。实验时，样本中的MMP-10与包被抗体结合，依次加入生物素化检测抗体、辣根过氧化物酶（HRP）标记的亲和素，形成复合物。洗涤后加入显色底物（TMB），在HRP催化下产生蓝色产物，终止反应后转为黄色。通过酶标仪测定450 nm波长下的吸光度（OD值），样本中MMP-10浓度与OD值呈正相关，标准曲线计算浓度。

试剂盒组成

预包被酶标板：96孔（12条×8孔）

MMP-10标准品：冻干粉2瓶（临用前用样本稀释液复溶至1 mL，浓度为1,000 pg/mL，可梯度稀释为500、250、125、62.5、31.25、15.625 pg/mL）

生物素化检测抗体：1瓶（6 mL）

HRP标记亲和素：1瓶（6 mL）

20×浓缩洗涤液：25 mL（使用前蒸馏水稀释20倍）

样本稀释液：6 mL

显色底物（TMB）：A液、B液各6 mL

终止液：6 mL（2M硫酸）

封板膜：2张

说明书及质检报告：各1份

需自备器材

酶标仪（450 nm滤光片）

精密移液器及一次性吸头

37℃恒温孵育箱

蒸馏水及离心管

操作步骤

复温：试剂盒室温平衡30分钟。

配液：将20×洗涤液稀释为1×工作液。

加样：

标准品孔：加入50 μL梯度浓度标准品。

样本孔：先加10 μL样本，再加40 μL样本稀释液（5倍稀释）。

空白孔：仅加样本稀释液。

孵育：37℃反应60分钟，洗涤5次。

加检测抗体：每孔加50 μL生物素化抗体，37℃孵育30分钟，洗涤。

加酶结合物：每孔加50 μL HRP-亲和素，37℃避光孵育30分钟，洗涤。

显色：加入TMB A/B液各50 μL，避光反应15分钟。

终止与检测：加50 μL终止液，15分钟内测定OD450 nm。

注意事项

避免反复冻融标准品或样本。

显色时间需严格控制，避免过度反应。

不同批次试剂不可混用。

技术参数

检测范围：15.625–1,000 pg/mL

灵敏度：≤10 pg/mL

批内/批间变异系数：均<10%

储存条件

未开封试剂盒2–8℃保存，复溶后标准品分装冻存（-20℃），避免反复冻融。

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