小鼠肿瘤坏死因子α(TNF-α)ELISA试剂盒

商品属性

基本信息

检测方法：双抗体夹心法（HRP标记）

适用样本：小鼠血清、血浆、细胞上清液及组织匀浆

检测范围：0.01 pg/mL至标准曲线上限

保存条件：2-8℃冷藏，避免冻融

有效期：6个月

实验原理

试剂盒采用双抗体夹心法检测小鼠TNF-α：

包被抗体：微孔板预包被抗小鼠TNF-α单克隆抗体。

样本孵育：样本中的TNF-α与固相抗体结合。

酶标抗体：加入HRP标记的检测抗体，形成“抗体-抗原-酶标抗体”复合物。

显色反应：TMB底物在HRP催化下显蓝色，终止液转化为黄色，吸光度（OD值）与TNF-α浓度正相关。

定量分析：通过450 nm波长测定OD值，标准曲线计算浓度。

样本处理

血清/血浆：

采集后3000 rpm离心10分钟（血浆需抗凝处理）。

分装冻存于-20℃，避免反复冻融。

细胞上清液：离心去除颗粒物后直接检测或冻存。

组织匀浆：按1:9比例加入生理盐水匀浆，离心取上清。

操作步骤

试剂准备：所有组分平衡至室温（20-25℃）。

加样：

标准品梯度稀释，样本按100 μL/孔加入微孔板。

37℃孵育90分钟，洗板5次。

酶标抗体：每孔加入HRP标记抗体100 μL，37℃孵育60分钟，洗板5次。

显色：加入TMB底物避光反应15-30分钟，终止液终止反应。

检测：酶标仪读取450 nm OD值（参考波长630 nm）。

注意事项

质量控制：

每批次建议复测标准曲线。

样本OD值超出标准曲线范围时需稀释后重测。

干扰因素：

避免溶血、脂血或反复冻融样本。

操作中避免次氯酸盐污染微孔板。

适用范围：仅限科研使用，不可用于临床诊断。

技术参数

精密度：批内变异系数（CV）<10%，批间CV<15%。

特异性：不与小鼠其他细胞因子（如IL-1β、IL-6）交叉反应。

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