K7M2WT(K7M2-WT)-LUC小鼠骨肉瘤成骨细胞荧光素酶标记

细胞属性：

抗原表达: CD31 阳性 [PubMed:1315100] 产物: 八因子 [PubMed: 11315100]; 整合唾液酸蛋白 (BSP) [PubMed11315100]; biglyan [PubMed: 11315100]; decorrin [PubMed:1315100]; villin 2 (ezrin) [PubMed: 11325848]. 骨唾液酸蛋白, biglyan, decorrin, 和 osteopontin 的表达显示其骨家族细胞特性。 在本库通过支原体检测。

1基本特征与来源

细胞来源：

源自BALB/c小鼠的骨肉瘤肺转移灶，属于成骨细胞类型，具有骨肉瘤的典型生物学特性。

形态与标记：

贴壁生长，形态为成骨细胞样，表达CD31阳性。

产物包括骨唾液酸蛋白（BSP）、整合唾液酸蛋白（BSP）、biglycan等骨家族标志物，证实其成骨分化特性。

基因修饰：

通过慢病毒转染携带萤火虫荧光素酶（Luc）基因，稳定表达荧光素酶，用于活体成像追踪肿瘤生长和转移。

2培养与冻存条件

培养基：

DMEM高糖培养10%胎牛血1%双抗（青霉素-链霉素），气相条件为95%空5CO，温度37℃。

传代与密度：

传代周期3-5天，推荐传代比例1:2至1:6，使用0.25%胰酶-EDTA消化。

传代后密度需达70%-80%再进行分瓶，避免长期超过80%导致分化。

冻存液：

90%胎牛血10DMSO，需现用现配，冻存管干冰运输或复苏后4℃暂存。

3荧光素酶标记特性

构建方法：

通过慢病毒载体（如FugW）整合Luc基因至基因组，结合嘌呤霉素筛选（终浓度2-μg/mL）维持稳定表达。

荧光检测：

荧光素（D-luciferin）腹腔注射后1-2分钟发光，峰值在10-30分钟，持续约3小时，推荐检测时间窗口为注射后15-35分钟。

发光强度与细胞数量正相关，适用于活体成像（IVIS系统）及体外细胞定量分析。

稳定性维护：

长期培养需定期用嘌呤霉素筛选（建议每3代一次），防止荧光素酶基因丢失。

4应用领域

肿瘤模型构建：

原位骨肉瘤模型：通过胫骨或颅骨注射（推荐剂量1×10cells/10μL），模拟人类骨肉瘤的肺转移（成功率>90%）。

皮下移植模型：用于药物疗效评估（如化疗或免疫治疗）。

机制研究：

研究骨肉瘤侵袭转移、血管生成（如VEGF通路）及耐药性。

结合基因编辑技术（如CRISPR敲除抑癌基因p53/Rb），验证特定基因功能。

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