GC-2 SPd(ts)小鼠精母细胞系

GC-2 SPd(ts)小鼠精母细胞系

 基本特性:

该细胞系来源于一6周龄的雄性BALB/c小鼠 新鲜分离的精母细胞通过共转染SV40大T抗原基因 (Psv3neo) 和温度敏感的p53抑癌基因突变 (LTRp53cG9)，建立获得GC-spd(ts) 细胞株。该细胞经G418筛选，培养6个月并经有限稀释法形成单细胞克隆三次。目前，该细胞已丧失其分化潜能，处于减数分裂前期。细胞含有乳多空病毒（papovavirus）

细胞特性

1） 来源： 小鼠精母细胞；SV40大T抗原转染

2） 形态：上皮细胞样 贴壁生长

3） 含量：>1x10^6  细胞数

一、来源与构建背景

起源与转染方法

该细胞系来源于6周龄雄性BALB/c小鼠的新鲜精母细胞，通过共转SV40大T抗原基因（pSV3neo温度敏感型p53抑癌基因突变体（LTRp53cG9建立[][][]。转染后经G-418筛选6个月，并通过有限稀释法克隆3次单细胞，最终获得永生化细胞株。

关键基因修饰

SV40大T抗原：赋予细胞增殖能力，突破正常细胞分裂周期限制。

p53突变体：通过温度敏感型设计（33℃活化、39℃失活），在特定条件下调控细胞周期检查点。

二、细胞特性与培养条件

形态与生长特性

形态：上皮样贴壁细胞，呈铺展生长。

生长周期：倍增时间约24-48小时，推荐传代比例1:2至1:5，密度达80%-90%时需传代。

冻存特性：推荐冻存液90FB10DMSO，复苏后存活率>90%。

培养体系

基础培养基：DMEM或RPMI-1640，含10%胎牛血清（FBS）、1%青霉素-链霉素（P/S）。

培养环境：37℃、5CO、饱和湿度，部分文献建议33℃培养以维持p53活性。

支原体检测：常规检测为阴性，需定期验证。

三、应用领域

精子发生机制研究

模拟减数分裂前阶段（premeiotiarrest），用于研究精子形成中的基因调控（如cAMP信号通路）和表观遗传修饰。

分析精母细胞凋亡与自噬的分子机制，例如通过Caspase-3/7活性检测。

药物筛选与毒性评估

作为睾丸毒性模型，评估化学物质（如顺铂）对生殖细胞的影响。

筛选促精子发生药物，如抗氧化剂（N-乙酰半胱氨酸）或生长因子（IGF-1）。

基因功能研究

构建基因敲除/过表达模型，研究睾丸发育相关基因（如Stra8、Piwil2）的功能。

研究端粒酶活性与细胞永生化的关系。

公司出售的产品：

 注意事项：

污染防控：细菌污染：培养液浑浊、变黄，需添加抗生素（如青霉素-链霉素），污染严重时丢弃。

霉菌污染：显微镜下可见丝状/絮状漂浮物，需彻底消毒培养箱（过氧乙酸擦拭+紫外线照射），污染细胞立即丢弃。

支原体污染：无明显外观变化，需定期用PCR或荧光法检测，污染后可用支原体清除试剂处理。

操作规范：收到细胞后，先检查包装完整性及干冰状态，镜检细胞形态并拍照记录（40x、100x、200x）。

未开封细胞若污染或活性差（3天内反馈），可申请重发；客户操作失误导致问题不重发。

运输与保存：干冰运输：冻存管含1×10⁶ cells，收到后立即转入液氮或-80℃冰箱。

常温运输：T25培养瓶，收到后静置3-4小时稳定状态，再换液或传代。