E14小鼠胚胎干细胞

E14小鼠胚胎干细胞

 基本特性:

小鼠胚胎干细胞。该细胞缺乏 HGPRT（HPRT），并且对 0.06 mM 的 6-硫鸟嘌呤有抗性。当在饲养层（胚胎成纤维细胞或 STO 细胞）上培养时，细胞保持未分化状态。在没有饲养层的情况下，细胞自发分化并形成胚胎结构。当注入胚泡中时，细胞可以进入生殖系。在常规的分子基因修饰技术之后，它们可用于重构小鼠胚胎。培养时需使用昆明白MEF作为饲养层细胞。

细胞特性

1） 来源：小鼠，129/Ola品系，胚胎内细胞团

2） 形态：球形克隆 贴壁生长

3） 含量：>1x10^6  细胞数

4） 规格：1mL冻存ᓾᓾ

一、细胞系基础信息

1来源与背景

品系来源：129/Ola小鼠品系的囊胚期内细胞团（ICM）

建立时间：1980年代，现为最常用的多能性干细胞模型之一

遗传特征：

性别：XY（雄性）

核型：正常二倍体（40,XY），但长期培养可能出现异常

2核心多能性特征

标志物  表达情况  功能关联

4-Oct  +++  多能性维持核心因子

Nanog  +++  自我更新调控

Sox2  ++  与Oct4协同作用

SSEA-1  +  小鼠多能性表面标志

二、培养体系与关键参数（2025年更新）

1经典培养方案

培养基：

基础配方：KnockOuDME15FBS（需批次测试）

必需添加物：

100U/mLIF（维持未分化状态）

1%非必需氨基酸

0.mβ-巯基乙醇

培养表面：明胶包被（0.1%）

2无饲养层培养趋势

化学成分明确培养基：

如2i培养基（MEK抑制剂PD032590GSK3抑制剂CHIR99021）

优势：减少变异，提高基因组稳定性（《CelSteCell》2025.6）

三、核心应用领域

1发育生物学研究

定向分化：

神经外胚层：N2/B27培养双SMAD抑制

心肌细胞：Wnt信号时序调控

2基因编辑平台

CRISPR-Cas9应用：

效率>80%（需优化sgRNA设计）

最新改进：碱基编辑技术避免DNA断裂（2025年《NaturBiotechnology》）

3疾病建模

线粒体疾病：通过mtDNA异质性构建模型

表观遗传疾病：印记基因调控研究

公司出售的产品：

 注意事项：

污染防控：细菌污染：培养液浑浊、变黄，需添加抗生素（如青霉素-链霉素），污染严重时丢弃。

霉菌污染：显微镜下可见丝状/絮状漂浮物，需彻底消毒培养箱（过氧乙酸擦拭+紫外线照射），污染细胞立即丢弃。

支原体污染：无明显外观变化，需定期用PCR或荧光法检测，污染后可用支原体清除试剂处理。

操作规范：收到细胞后，先检查包装完整性及干冰状态，镜检细胞形态并拍照记录（40x、100x、200x）。

未开封细胞若污染或活性差（3天内反馈），可申请重发；客户操作失误导致问题不重发。

运输与保存：干冰运输：冻存管含1×10⁶ cells，收到后立即转入液氮或-80℃冰箱。

常温运输：T25培养瓶，收到后静置3-4小时稳定状态，再换液或传代。