总超氧化物歧化酶活性测定试剂盒(WST-8法) | Total Superoxide Dismutase Activity | T-SOD | EnkiLife恩玑生命

产品简介

总SOD活性检测试剂盒(WST-8法)是一种基于WST-8的显色反应，通过比色来检测细胞、组织或其它样品中SOD即超氧化物歧化酶活性的试剂盒。

超氧化物歧化酶(Superoxide Dismutase, SOD)能催化超氧化物阴离子发生歧化作用，生成过氧化氢(H₂O₂)和氧气(O₂)，是生物体内一种重要的抗氧化酶。目前有多种SOD活性测定法，其中NBT(氮蓝四唑)法由于使用方便而被广泛使用。但NBT法产生的甲臜染料水溶性差，易和被还原的黄嘌呤氧化酶相互作用，抑制百分率达不到100%等，从而使检测的灵敏度和精确度受到影响；细胞色素C法也是一种常用来检测SOD活性的方法，但细胞色素C其氧化活性高，易受样品中的还原剂干扰，另外该方法需要连续测定吸光度值，对于SOD的检测灵敏度比较低，并且不太适合大批量样本的检测；WST-1法和WST-8法类似，相较上述方法更为先进。本试剂盒采用了目前测定SOD方法中稳定性更好、灵敏度更高的WST-8法，可以检测出低达0.5U/ml的SOD。

产品特点

★ 方法学优势：

l WST-8的反应产物是稳定的水溶性产物，可以通过单个时间点的吸光度检测来测定SOD酶活力，适合高通量筛选研究；WST-8法测定SOD酶活力时，最大抑制百分率可以接近100%，并且可以不受一些常见的干扰因素的干扰，使检测效果比其它的一些常见方法显著改善。

l 本试剂盒的性能优于同类产品总SOD活性检测试剂盒(NBT法)。

l 本产品的用途与同类产品总SOD活性检测试剂盒(NBT法)相同，等量SOD导致的吸光度变化值显著大于NBT法，线性范围更宽。

★ 便捷：本试剂盒提供的SOD样品制备液能直接裂解细胞，无需匀浆，操作更加便捷。

检测原理     

WST-8可以和黄嘌呤氧化酶(Xanthine Oxidase, XO)催化产生的超氧化物阴离子(O₂-)反应产生水溶性的甲臜染料(formazan dye)。由于SOD能催化超氧化物阴离子发生歧化作用，所以该反应步骤可以被SOD所抑制，因此SOD的活性与甲臜染料的生成量成负相关，从而通过对WST-8产物的比色分析即可计算SOD的酶活力。本试剂盒的原理图如下所示：

产品组分

保存条件

未拆封的试剂盒可在 -20℃保存12个月。

注意事项

1. 待测样品-70℃可保存1个月。需注意反复冻融会导致SOD部分失活。

2. 一个试剂盒如果不能在3次内使用完毕，其中的WST-8需要在首次使用时适当分装，以避免反复冻融导致的检测效果下降。

3. 标准品稀释时所用的稀释液应尽量与样品一致。在计算样品中实际的酶活力时注意是否进行过稀释，如有稀释还应该乘以稀释倍数。

4. 抗氧化物会对本试剂盒的检测产生干扰，例如0.1mM ascorbic acid，5mM GSH都会使测定出来的吸光度显著升高。此时尽管样品没有颜色，如果设置了空白对照3，就可以消除样品中的抗氧化物的干扰。

5. 本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。

6. 本试剂盒无需绘制标准曲线即可得到检测结果。如果用户需要且自行准备SOD标准品（本试剂盒不提供），也可采用标准曲线法计算SOD酶活力。标准曲线法的参考方案为：可以先使用本试剂盒绘制SOD标准品的抑制百分率曲线（如图2C所示），然后根据样品检测到的抑制百分率对比标准品的抑制百分率曲线计算出样品中的SOD酶活力单位。

图2. 本试剂盒对SOD标准品的检测效果。A）纵坐标ΔA450为孵育30分钟后，空白对照1与SOD标准品孔的吸光度差值。B）SOD酶活力和ΔA450 (图A)及抑制百分率(图B)呈非线性关系。C）1/SOD酶活力和1/抑制百分率成线性关系，可以作为标准曲线。图中数据仅作参考，实际测定获得的标准曲线的斜率和截距可能会因具体反应条件的不同和上图有较明显的差别。

7. 如果条件许可，使用本试剂盒时也可以使用动力学方法检测SOD的酶活力。通常在步骤3a后可以37℃孵育同时在450nm连续测定吸光度30分钟。根据30分钟内的吸光度变化的斜率计算出抑制百分率：

其余的计算方法同上述非动力学的计算方法。动力学方法的检测和计算更加精确一些，但检测起来相对要麻烦一些。本试剂盒通常使用非动力学方法即可。