C3H/10T1/2, Clone 8小鼠胚胎肉瘤细胞

C3H/10T1/2, Clone 8小鼠胚胎肉瘤细胞

 基本特性:

种属来源:小鼠

性别年龄:雌性

组织来源:胚胎

生长特性:贴壁生长

细胞形态:成纤维细胞

细胞规格:1 X 106cells/T25或1 mL冻存管

培养条件:Eagle's Basal medium + 10% h.i. fetal bovine serum (FBS) + 2mM L-glutamine37 ℃, 5% CO2

冻存条件:90% FBS + 10% DMSO

传代方法:1：3传代，1周传1代

一、细胞系核心背景

起源与特性

来源：源自C3H小鼠胚胎间充质组织，经化学致癌剂（如3-甲基胆蒽）诱导转化，获得永生化但未完全恶性表型。

独特定位：

介于正常间充质干细胞与肉瘤细胞之间，可向 成骨/软骨/脂肪细胞 分化（多潜能性）。

常用于研究 早期肿瘤转化机制 及 间充质干细胞定向分化。

关键生物学特征

标志物表达：

阳性标记  阴性/低表达

CD44（干细胞标志）  成熟成骨细胞标记（OCN）

Sox2  肌细胞标记（MyoD）

PPARγ（脂肪分化）  恶性转移蛋白（MMP9）

基因组稳定性：保留二倍体核型，但易受致癌剂诱导突变（如Ras通路激活）。

二、前沿研究应用

1. 肿瘤生物学研究

致癌机制：

通过 TP53敲除 或 Ras突变导入 模拟肉瘤发生（2025年《Cancer Res》新模型）；

研究 炎症微环境（如IL-6刺激）对肿瘤启动的影响。

药物筛选：

测试靶向 Wnt/β-catenin通路 抑制剂（如LGK974）对分化阻断的作用。

2. 干细胞与再生医学

多向分化能力：

成骨分化：地塞米松+β-甘油磷酸钠诱导（ALP染色验证）；

脂肪分化：胰岛素+IBMX+地塞米松诱导（油红O染色）；

软骨分化：TGF-β3+抗坏血酸微球培养（阿尔新蓝染色）。

组织工程：与生物支架（如PLGA）结合构建类器官。

3. 毒理学与环境科学

致癌物检测：通过软琼脂克隆形成实验评估化学物质（如苯并芘）的转化潜力。

三、标准化培养方案

1. 培养条件

培养基：DMEM高糖 + 10% FBS + 1%双抗（青霉素/链霉素），需补充 1 mM丙酮酸钠（增强代谢）。

传代要点：

贴壁生长，80%融合时用 0.25%胰酶 消化2分钟（过度消化导致分化潜能丧失）；

接种密度建议1×10?/cm2（低密度维持干细胞特性）。

2. 分化诱导流程

成骨分化（21天）：

诱导剂：50 μM抗坏血酸 + 10 mM β-甘油磷酸钠 + 100 nM地塞米松；

检测：茜素红染色钙结节。

脂肪分化（14天）：

诱导剂：0.5 mM IBMX + 1 μM地塞米松 + 10 μg/mL胰岛素；

检测：油红O染色脂滴。

3. 质量控制

支原体检测：每月PCR检测（推荐MycoAlert试剂盒）；

功能验证：每3代检测分化潜能（至少一种谱系）。

公司出售的产品：

 注意事项：

污染防控：细菌污染：培养液浑浊、变黄，需添加抗生素（如青霉素-链霉素），污染严重时丢弃。

霉菌污染：显微镜下可见丝状/絮状漂浮物，需彻底消毒培养箱（过氧乙酸擦拭+紫外线照射），污染细胞立即丢弃。

支原体污染：无明显外观变化，需定期用PCR或荧光法检测，污染后可用支原体清除试剂处理。

操作规范：收到细胞后，先检查包装完整性及干冰状态，镜检细胞形态并拍照记录（40x、100x、200x）。

未开封细胞若污染或活性差（3天内反馈），可申请重发；客户操作失误导致问题不重发。

运输与保存：干冰运输：冻存管含1×10⁶ cells，收到后立即转入液氮或-80℃冰箱。

常温运输：T25培养瓶，收到后静置3-4小时稳定状态，再换液或传代。