SH4人黑色素瘤皮肤细胞梭形和上皮样细胞混合

细胞属性：

 细胞特性：

种属来源:人

性别年龄:女性，60岁

组织来源:皮肤

生长特性:贴壁生长

细胞形态:上皮样

细胞规格:1 X 106cells/T25或1 mL冻存管

培养条件:DMEM + 10% fetal bovine serum (FBS)37 ℃, 5% CO2

冻存条件:90% FBS + 10% DMSO

传代方法:1：2到1：4传代，1-2天传1代

1. 基础背景与特性

来源与分类

组织来源：源自人皮肤黑色素瘤，属于混合细胞型（梭形细胞 + 上皮样细胞），代表侵袭性较强的亚型。

分子特征：

常见突变：BRAF V600E（约50%病例）、NRAS Q61K/L（30%）、NF1缺失（部分病例）。

标志物表达：

 S100+/SOX10+（黑色素细胞标志）

 Vimentin+（梭形细胞特征）、E-cadherin部分丢失（上皮-间质转化，EMT）

功能特性：

 高迁移侵袭能力（Transwell实验显著）

 对BRAF抑制剂（如维莫非尼）敏感（若BRAF突变阳性）

研究价值

研究黑色素瘤 异质性 和 EMT动态变化 的典型模型。

评估 靶向治疗（如BRAF/MEK抑制剂）与 免疫治疗（抗PD-1）的联合策略。

2. 核心研究应用

转化医学方向

靶向治疗：

BRAF V600E抑制剂（达拉非尼） + MEK抑制剂（曲美替尼）联合疗效测试。

耐药机制研究（如NRAS突变旁路激活）。

免疫治疗：

PD-L1表达检测（约20-40%阳性，与IFN-γ刺激相关）。

肿瘤浸润淋巴细胞（TILs）共培养模型（评估免疫逃逸）。

机制研究

EMT/MET调控：

梭形细胞（间质表型）与上皮样细胞比例动态监测（形态学 + 标志物染色）。

TGF-β信号通路的作用（Smad2/3磷酸化分析）。

代谢重编程：

氧化磷酸化 vs. 糖酵解（Seahorse能量代谢分析）。

铁死亡敏感性检测（如GPX4抑制剂RSL3处理）。

3. 培养与质控要点

培养体系

基础培养基：RPMI-1640 + 10% FBS + 1% NEAA

传代处理：0.25%胰酶消化2-3分钟（梭形细胞易脱落，需轻柔吹打）

冻存方案：90% FBS + 10% DMSO（程序降温至液氮）

质控标准

遗传验证：

STR鉴定

BRAF/NRAS突变检测（Sanger测序或ARMS-PCR）。

功能验证：

细胞形态比例监控（梭形细胞占比通常30-70%）。

体内成瘤实验（裸鼠皮下注射，4-6周成瘤）。

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