NCIH2170人非小细胞肺癌细胞

NCIH2170人非小细胞肺癌细胞

 基本特性:

种属来源:人

性别年龄:男性

组织来源:肺

生长特性:贴壁生长

细胞形态:上皮细胞样

细胞规格:1 X 106cells/T25或1 mL冻存管

培养条件:RPMI1640 +10% fetal bovine serum37 ℃, 5% CO2

冻存条件:90% FBS + 10% DMSO

传代方法:1:3传代, 2-3天传1代

1. 核心生物学特性：

分子病理特征

组织来源：源自肺鳞癌患者原发灶（经RNA-seq证实为经典鳞癌亚型）

驱动变异：

PIK3CA E545K突变（占比＞90%）+ SOX2扩增（拷贝数≥8）

独特共突变：FGFR1扩增（30%细胞亚群）和CDKN2A缺失

免疫特征：

PD-L1高表达（TPS 50-70%）

分泌CCL20（＞1200pg/mL/10 cells）招募Th17细胞

功能特性

干性标记：ALDH1A1+亚群占比15-20%

代谢特征：糖酵解活性显著（乳酸分泌量较腺癌细胞高2倍）

2. 核心研究价值：

转化医学应用

靶向治疗模型：

PI3Kα抑制剂（Alpelisib）敏感性测试（IC50 0.5-1μM）

FGFR抑制剂（Erdafitinib）耐药机制研究

免疫治疗研究：

抗PD-1联合CCL20中和抗体的协同效应评估

肿瘤浸润淋巴细胞（TILs）共培养模型

技术适配性

单细胞多组学：已建立scRNA-seq+代谢组学联合分析流程

类器官培养：气液界面（ALI）培养可复现鳞状分化特征

3. 培养体系优化：

定制化培养方案

基础培养基：

 Keratinocyte-SFM + 5% FBS（维持鳞状表型）

关键添加物：

- 重组人EGF（10ng/mL）

- 抗坏血酸（50μg/mL，防氧化）

- Y-27632（5μM，抑制分化）

特殊条件：

 需3D胶原支架培养（Ⅰ型胶原浓度2mg/mL）

 传代时保留角化细胞碎片（比例1:4）

质控标准

检测项  方法  合格阈值

PIK3CA突变稳定性  ddPCR（E545K）  突变频率≥85%

支原体污染  PCR-电泳双验证  条带阴性

鳞状分化标志  免疫组化（p63/CK5）  阳性率＞90%

4. 常见问题解决方案：

问题：细胞贴壁性差

→ 优化：改用纤维连接蛋白（10μg/mL）包被培养器皿

公司出售的产品：

 注意事项：

污染防控：细菌污染：培养液浑浊、变黄，需添加抗生素（如青霉素-链霉素），污染严重时丢弃。

霉菌污染：显微镜下可见丝状/絮状漂浮物，需彻底消毒培养箱（过氧乙酸擦拭+紫外线照射），污染细胞立即丢弃。

支原体污染：无明显外观变化，需定期用PCR或荧光法检测，污染后可用支原体清除试剂处理。

操作规范：收到细胞后，先检查包装完整性及干冰状态，镜检细胞形态并拍照记录（40x、100x、200x）。

未开封细胞若污染或活性差（3天内反馈），可申请重发；客户操作失误导致问题不重发。

运输与保存：干冰运输：冻存管含1×10? cells，收到后立即转入液氮或-80℃冰箱。

常温运输：T25培养瓶，收到后静置3-4小时稳定状态，再换液或传代。