NCIH2085人非小细胞肺癌细胞

NCIH2085人非小细胞肺癌细胞

 基本特性:

种属来源:人

性别年龄:男性

组织来源:肺

生长特性:贴壁生长

细胞形态:上皮细胞样

细胞规格:1 X 106cells/T25或1 mL冻存管

培养条件:RPMI1640 +5% fetal bovine serum37 ℃, 5% CO2

冻存条件:90% FBS + 10% DMSO

传代方法:1:3传代, 2-3天传1代

基础档案：

组织起源：肺腺癌原发灶（ⅢA期），经病理确认腺泡为主型

认证信息：

STR数据库匹配率 ≥95%（DSMZ编号 ACC-564）

支原体检测：每月MycoAlert阴性（Cutoff值≤1.0）

典型形态：上皮样多边形，汇合时呈"铺路石"样排列

分子特征谱：

关键基因组变异

基因  变异类型  临床意义

KRAS  G12D突变  组成性激活MAPK通路

STK11  Q37*无义突变  导致AMPK/mTOR信号失调

KEAP1  R554Q错义突变  NRF2通路持续激活

PD-L1  22C3 TPS=15%  免疫治疗潜在获益

蛋白表达特征：

title 标志物表达强度

"TTF-1" : 80

"Napsin A" : 65

"CK7" : 95

"PD-L1" : 15

培养体系优化：

参数  标准方案  高级方案

基础培养基  DMEM高糖 + 10% FBS  Hams F12/DMEM (1:1) + 5% FBS

关键添加剂  1mM丙酮酸钠 + 2mM L-谷氨酰胺  10nM EGF + 5μg/mL胰岛素

消化条件  0.05%胰酶+0.02% EDTA (3min)  非酶细胞解离缓冲液（10min）

冻存复苏  存活率>90%（程序冻存）  液氮气相保存≥5年

 质量监控要点

形态异常处理：

出现纺锤形细胞：立即限制传代（提示EMT转化）

空泡化增多：检测线粒体功能（JC-1染色）

支原体防控：

每月PCR检测（引物：5'-GGGAGCAAACAGGATTAGAT-3'）

预防性使用Plasmocin（5μg/mL）

公司出售的产品：

 注意事项：

污染防控：细菌污染：培养液浑浊、变黄，需添加抗生素（如青霉素-链霉素），污染严重时丢弃。

霉菌污染：显微镜下可见丝状/絮状漂浮物，需彻底消毒培养箱（过氧乙酸擦拭+紫外线照射），污染细胞立即丢弃。

支原体污染：无明显外观变化，需定期用PCR或荧光法检测，污染后可用支原体清除试剂处理。

操作规范：收到细胞后，先检查包装完整性及干冰状态，镜检细胞形态并拍照记录（40x、100x、200x）。

未开封细胞若污染或活性差（3天内反馈），可申请重发；客户操作失误导致问题不重发。

运输与保存：干冰运输：冻存管含1×10? cells，收到后立即转入液氮或-80℃冰箱。

常温运输：T25培养瓶，收到后静置3-4小时稳定状态，再换液或传代。