M14人黑色素瘤细胞

M14人黑色素瘤细胞

 基本特性:

种属来源:人

性别年龄:男性，33岁

组织来源:皮肤

生长特性:贴壁生长

细胞形态:成纤维细胞样

细胞规格:1 X 106cells/T25或1 mL冻存管

培养条件:RPMI 1640 + 10% fetal bovine serum (FBS)+1%P/S37 ℃, 5% CO2

冻存条件:90% FBS + 10% DMSO

传代方法:1:3传代, 2-3天传1代

细胞特性：

来源与分类

组织类型：人皮肤黑色素瘤（恶性程度高，转移性强）

分子特征：

常见突变：BRAF V600E（需测序验证）、NRAS突变（约15-20%概率）

标志物：S100阳性、HMB-45阳性（通过免疫组化确认）

研究价值：

靶向治疗模型：适用于BRAF抑制剂（如维莫非尼）耐药机制研究

免疫治疗：PD-L1表达检测（建议使用28-8抗体）

培养特性

生长方式：贴壁生长，形态不规则（梭形或多角形）

倍增时间：约24-36小时（需实际验证）

2. 核心研究方向

靶向治疗开发

BRAF/MEK抑制剂测试：

维莫非尼（BRAF抑制剂）单药及与考比替尼（MEK抑制剂）联用效果

耐药机制：检测NRAS突变或MAPK通路再激活

免疫治疗探索：

与T细胞共培养（检测PD-1/PD-L1阻断效果）

转移机制研究

侵袭实验：

Transwell实验（Matrigel涂层，8μm孔径）

关键通路：PI3K/AKT或Wnt/β-catenin信号调控

3. 培养规范

培养条件

培养基：DMEM高糖 + 10% FBS + 1% NEAA（非必需氨基酸）

传代要点：

消化时间：0.25%胰酶-EDTA处理3-5分钟

接种密度：1×10? cells/cm2（避免过度生长）

质量控制

必检项目：

STR分型（比对ATCC/DSMZ数据库）

支原体检测（每月PCR）

4. 实验设计建议

动物模型

皮下成瘤：

接种量：2×10? cells/鼠（Matrigel 1:1混合）

监测：肿瘤体积测量（每周2次）

公司出售的产品：

 注意事项：

污染防控：细菌污染：培养液浑浊、变黄，需添加抗生素（如青霉素-链霉素），污染严重时丢弃。

霉菌污染：显微镜下可见丝状/絮状漂浮物，需彻底消毒培养箱（过氧乙酸擦拭+紫外线照射），污染细胞立即丢弃。

支原体污染：无明显外观变化，需定期用PCR或荧光法检测，污染后可用支原体清除试剂处理。

操作规范：收到细胞后，先检查包装完整性及干冰状态，镜检细胞形态并拍照记录（40x、100x、200x）。

未开封细胞若污染或活性差（3天内反馈），可申请重发；客户操作失误导致问题不重发。

运输与保存：干冰运输：冻存管含1×10? cells，收到后立即转入液氮或-80℃冰箱。

常温运输：T25培养瓶，收到后静置3-4小时稳定状态，再换液或传代。