木质素（Lignin）含量检测试剂盒(微量法100T/96S)

木质素（Lignin）含量试剂盒说明书

                                                  微量法 100管/96样

正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定                                             

测定意义：

木质素是构成植物细胞壁的成分之一，是由聚合的芳香醇构成的一类物质，存在于木质组织中，主要作用是通过形成交织网来硬化细胞壁。木质素主要位于纤维素纤维之间，起抗压作用。

测定原理：

木质素中的酚羟基发生乙酰化后在280nm处有特征吸收峰，280nm的吸光值高低与木质素含量正相关。

试剂组成和配制：

自备仪器和用品：

天平、40目筛，玻璃试管、烧杯、离心机，恒温水浴锅、封口膜、烘箱、紫外分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板(UV板)、高氯酸，浓硫酸。

样品处理：

样品80℃烘干至恒重，粉碎，过40目筛，称取约2mg（记为W）于10ml玻璃试管中（务必用玻璃试管，不可用Ep管）。

测定步骤：

于10ml玻璃试管中，用封口膜密封，充分混匀，80℃水浴40min，每隔10min震荡一次，然后自然冷却

充分混匀

取200μl于微量石英比色皿/96孔板，测定280nm处吸光值A。分别记为A空白管和A测定管，ΔA=A测定管-A空白管

计算公式：

标准曲线：y = 0.0347x+0.0068，R2=0.9889

Lignin（mg/g干重）= (ΔA-0.0068)÷0.0347×V反总×10-3÷W×T=0.0294×(ΔA-0.0068) ÷0.002×50

V反总：反应总体积：1.02ml；W：样本质量，g；T：稀释倍数

注意事项：

1、试剂一有毒性，请操作时做好防护措施，加热前必须用封口膜密封，以防气体溢出。

2、加热过程中有剧烈反应，震荡时轻摇，以免压力过大喷出造成人身伤害。

3、试剂三具有强刺激性，建议操作过程全部在通风橱子操作。

4、取上清加试剂三步骤根据自己样品乙酰化程度，试剂三的用量可调整，保证吸光值在0.1-0.8之间即可，并在公式中参与计算。