漆酶检测试剂盒(分光光度法50T/24S)

漆酶（Laccase）试剂盒说明书

微量法100T/48S

正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定

测定意义：

漆酶（CE1.10.3.2）是一种含铜的多酚氧化酶，属于铜蓝氧化酶家族，广泛分布于真菌和高等植物中，

具有较强的氧化还原能力，在纸浆生物漂白，环境污染物降解和木质纤维素降解以及生物检测方面有非常

广泛的应用。

测定原理：

漆酶分解底物ABTS产生ABTS自由基，在420nm处的吸光系数远大于底物ABTS，测定ABTS自由

基的增加速率，可计算得漆酶活性。

自备仪器和用品：

天平、低温离心机、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板、恒温水浴锅。

酶液提取：

1、组织：按照组织质量（g）：提取液体积(ml)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1ml

提取液），进行冰浴匀浆。12000g4℃离心30min，取上清，置冰上待测。

2、细胞：按照细胞数量（104个）：提取液体积（ml）为500~1000：1的比例（建议500万细胞加入

1ml提取液），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3秒，间隔7秒，总时间3min）；然后4℃，10000g

离心10min，取上清置于冰上待测。

3、细胞培养液：直接检测。

注意事项

1、极少数样本在60℃水浴20min后会出现沉淀，可经过8000g25℃离心10min后，取上清检测，例

如成熟的水稻叶片样本。

2、为确保检测准确性，若ΔA大于1，将样本用提取液稀释2~10倍后重新检测，计算公式乘以相应

稀释倍数。

酶活性计算公式：

a．用微量石英比色皿测定的计算公式如下

1．按照蛋白浓度计算

酶活性定义：每毫克蛋白每分钟氧化1nmol底物ABTS所需的酶量为一个酶活力单位。

漆酶活性（nmol/min/mgprot）=×V反总÷（V样×Cpr）÷T=9.26×△A÷Cpr

2．按照样本质量计算

酶活性定义：每克样品每分钟氧化1nmol底物ABTS所需的酶量为一个酶活力单位。

漆酶活性（nmol/min/g鲜重）=×V反总÷（V样×W÷V样总）÷T=9.26×△A÷W

3．按照细胞数量计算

酶活性定义：每104个细胞每分钟氧化1nmol底物ABTS所需的酶量为一个酶活力单位。

漆酶活性（nmol/min/104cell）=×V反总÷（V样×细胞数量÷V样总）÷T=9.26×△A÷细胞数量

4．按照液体体积计算

酶活性定义：每升培养液每分钟氧化1nmol底物ABTS所需的酶量为一个酶活力单位。

漆酶活性（nmol/min/L）=×V反总÷V样÷T=9260×△A

ε：ABTS毫摩尔消光系数：36L/mmol/cm；d：比色皿光径，1cm；V反总：反应总体积，0.3ml；V

样：反应体系中样本体积，0.03ml；V样总：加入提取液体积，1ml；Cpr：样本蛋白浓度，mg/ml；W，

样本质量，g；T：反应时间，20min

b.用96孔板测定的计算公式如下

1．按照蛋白浓度计算

酶活性定义：每毫克蛋白每分钟氧化1nmol底物ABTS所需的酶量为一个酶活力单位。

漆酶活性（nmol/min/mgprot）=×V反总÷（V样×Cpr）÷T=18.52×△A÷Cpr

2．按照样本质量计算

酶活性定义：每克样品每分钟氧化1nmol底物ABTS所需的酶量为一个酶活力单位。

漆酶活性（nmol/min/g鲜重）=×V反总÷（V样×W÷V样总）÷T=18.52×△A÷W

3．按照细胞数量计算

酶活性定义：每104个细胞每分钟氧化1nmol底物ABTS所需的酶量为一个酶活力单位。

漆酶活性（nmol/min/104cell）=×V反总÷（V样×细胞数量÷V样总）÷T

=18.52×△A÷细胞数量

4．按照液体体积计算

酶活性定义：每升培养液每分钟氧化1nmol底物ABTS所需的酶量为一个酶活力单位。

漆酶活性（nmol/min/L）=×V反总÷V样÷T=18520×△A

ε：ABTS毫摩尔消光系数：36L/mmol/cm；d：比色皿光径，0.5cm；V反总：反应总体积，0.3ml；V

样：反应中样本体积，0.045ml；V样总：加入提取液体积，1ml；Cpr：样本蛋白浓度，mg/ml；W，样本

质量，g；T：反应时间，20min。