CRT（人神经胶质瘤细胞）YB-71270HC

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CRT（人神经胶质瘤细胞）

生长培养基：DMEM+10% FBS+1% P/S

规格：1×10⁶cells/T25培养瓶

贴壁细胞传代培养：

1. 吸取并弃掉培养瓶中培养基。

2. 加入1.0 mL 0.25（w/v）Trypsin-0.53mM EDTA溶液，并置于37℃培养箱中孵育，直至细胞从壁上脱落分离。此过程大约需要3至5分钟（此处为12.5 cm2培养瓶所用体积，可根据实际情况增减用量）。

3. 加入2mL完全培养基中和胰蛋白酶，并轻轻吹打将细胞从培养瓶表面吹落，并使细胞分散。

4. 离心200x g/5 min，去除上清后，取适量的培养基将细胞重悬,取适量悬液置于新的培养瓶中，并加入新鲜细胞完全培养基至总体积为4mL。

5. 将细胞置于含有5%CO2的37℃恒温培养箱中培养。

传代比例：建议 1:6 至 1:9

培养基换液: 每隔 2 至 3 天。

悬浮细胞传代培养：

悬浮细胞的传代可通过补加或置换新鲜培养基的方式来完成，具体做法如下：

1. 取出少量细胞悬液进行细胞计数及活力检测，当细胞密度达到1×106 cells/mL 时，进行细胞传代培养。

2. 取足量细胞加入到盛有新鲜培养基的培养瓶中，将细胞密度维持在2-3×10⁵cells/mL。

3. 将培养瓶竖直放置于含有5%CO2的37℃恒温培养箱中培养。如果细胞达到传代培养的密度，则进行传代培养。

培养基换液: 每隔2至3天。

注意：培养瓶应使用带滤膜瓶盖以保持培养基与空气和CO2

拆包 & 存储：

1. 请立即检查包装袋是否有破损或漏液

2. 请立即将细胞培养瓶从包装盒中取出，并按照下方操作步骤进行培养传代

注意：如为冻存管，请收到后立即解冻培养

培养瓶中细胞操作步骤：

对于贴壁培养的细胞，寄送前，我们会将培养基充满整个培养瓶，以减少产品运输过程中贴壁细胞的脱落。

1. 收到细胞产品后，请注意观察是否有污染。将培养瓶置于倒置显微镜下仔细检查是否浑浊、是否细菌污染。因在运输过程中存在颠簸，且有些细胞对温度变化也很敏感，可能存在一些细胞脱落漂浮的情况，这些细胞仍是活细胞，请勿丢弃，可离心富集后传代使用。

2. 对于贴壁培养的细胞，在生物安全柜环境中，用真空泵去除培养瓶中的多余培养基，至剩余5-8mL左右，随后将细胞置于含有5% CO2的37℃恒温 培养箱中培养。如果细胞已经长满培养瓶，请立即传代。

3. 对于悬浮培养的细胞，在生物安全柜环境中，转移培养瓶中的细胞至离心管中，离心200×g / 5 - 10 min，去除上清后，用5 mL培养基吹散细胞，转移至新的培养瓶中，随后置于含有5% CO2的37℃恒温培养箱中培养。

冻存细胞操作步骤：

注意：为保存细胞的高存活率，请收到产品后，立即解冻培养。

1.将冻存管置于37℃ 水浴中来回晃动，迅速解冻。为避免污染，确保冻存管口置于水面之上。解冻需迅速，大约2分钟。

2. 一旦冻存管中液体融化后，立即取出，采用 70%酒精喷拭冻存管表面。从此步开始，后续操作须在生物安全柜中完成。

3.将冻存管中的液体转移到含有5mL完全培养基的离心管中， 离心200×g / 5 - 10 min，用真空泵去除含有冻存液的上清。

4. 用完全培养基重新悬浮细胞并转移到新的培养瓶中。为保证细胞复苏的存活率，请将培养基在37℃水浴预热后使用。

5. 将细胞置于含有5%CO2的37℃恒温培养箱中培养。

细胞产品的售后政策： 

1、收到细胞24小时内出现细菌、真菌、霉菌污染，72小时检测支原体阳性无条件重发；

2、享有1个月的超长售后免责期；  

3、1个月内，如果第三方鉴定STR错误，可退细胞款项。

4. 细胞运输途中遭遇的问题：丢件、瓶身破损、培养液渗漏；

5. 细胞污染问题，请在收到产品24小时内，给我们提供真实有效实验结果，供核实；

6. 常温发货的细胞经过24小时静置后，有大部分细胞未存活（需提供真实、清晰的细胞状态照片）

7. 干冰冻存管发货的细胞复苏之后，有大部分细胞未存活（需提供真实、清晰的细胞状态照片）；