Trap染色试剂盒

Trap染色试剂盒

产品简介：

酸性磷酸酶(acidphosphatase，ACP)遍布各种组织，分布极为广泛，因为主要存在于细胞的溶酶体内，

所以通常被当作溶酶体标志酶。而溶酶体外的酸性磷酸酶存在于胞质内和内质网。不同种类的动物体内所

含的酸性磷酸酶也不同，酸性磷酸酶的适宜pH范围在4.5～5.5之间。白血病人脾脏和正常人肺泡巨噬细

胞存在的的抗酒石酸酸性磷酸酶(Tartrate-resistntacidphosphatase，TRAP)并不是释放入血液，而是在细胞

滤泡中。血液中绝大多数的TRAP来源于破骨细胞，因此可以通过测量血液中的TRAP了解破骨细胞的功

能状态。

BIOISCO抗酒石酸酸性磷酸酶染色液将萘酚AS-BI作为底物，在酸性pH条件下被酸性磷酸酶水解释

放出萘酚和磷酸，萘酚可以偶联重氮盐从而生成定位于细胞质中的有色产物，如果细胞内的ACP有抗酒

石酸的活性，则呈阳性反应。该染色液不仅可用于细胞涂片、新鲜血涂片，还可以用于石蜡切片、冰冻切

片。

储存条件：

4℃避光保存，6个月有效。

自备材料：

1、恒温箱、蒸馏水。

2、载玻片、推玻片。

3、光学显微镜。

操作步骤（仅供参考）：

(一)血液、细胞涂片：

1、推片：在载坡片上放置新鲜血液或骨髓涂片，于载玻片处将推玻片保持30度，置于细胞滴液或血液

的正前方，往后稍微移动与血液或细胞滴液接触使后者沿推片下缘散开，此时沿载玻片平面匀速平稳向前

滑动直至铺满血膜为止。

2、自然晾干后使用TRAP固定液固定。

3、水洗，略微晾干(不易过分干燥)。

(二)冰冻切片：

1、冰冻切片回温至37℃，水中浸泡1～2min。

2、自然晾干，固定液室温固定1～3min。

3、水洗，稍微晾干(不易过分干燥)。

4、轻轻向切片上滴加适量染色液，覆盖组织，置于37℃温箱，避光浸染45～60min，水洗。

5、复染：苏木素染色液染色5～8min或甲基绿染色液染色2～3min。

6、水洗、晾干、镜检。

(三)石蜡切片：

1、石蜡切片脱蜡5-10min，重复此步骤一次。

2、无水乙醇5min，90%乙醇和70%乙醇各2min。

3、水洗2min。

4、自然晾干后使用TRAP固定液固定30s-3min，多数情况下30-60s即可。

5、水洗，略微晾干(不易过分干燥)。

6、轻轻向切片上滴加适量染色液，覆盖组织，置于37℃温箱，浸染45～60min，水洗。

7、复染：苏木素染色液染色5～8min或甲基绿染色液染色2～3min。

8、水洗、晾干、镜检。

染色结果：

临床意义：

1、毛细胞白血病的毛细胞ACP染色后呈现出中度阳性或强阳性，且酒石酸无法抑制，此时其他细胞均

呈现极弱阳性或阴性。

2、原粒细胞对ACP反应不一，急性白血病幼单核细胞ACP染色呈现阳性，原淋巴细胞呈现弱阳性。

3、T淋巴细胞ACP染色呈现阳性，颗粒粗大、分布密集。B淋巴细胞呈现阴性或颗粒细小的弱阳性。

4、戈谢细胞呈现强阳性，尼曼-皮克细胞呈现阴性或弱阳性。

注意事项：

1、TRAP孵育液非常容易失效，本法适合使用皮肤穿刺血涂片，处理晾干后的样本需及时染色。

2、冰冻切片染色时，应当减少切片在室温下所暴露的时间。

3、为避免酶的活性受到影响，实验所用样本应新鲜，取材后需立即处理。

4、需在4℃冰箱内进行组织固定，固定时间不宜超过24h，否则酶的活性会出现减弱或消失。

5、组织在石蜡包埋时，温度不宜高于56℃。为防止酶活性减弱或消失。应使用熔点为52～54℃的石蜡

进行浸蜡，浸蜡时间要短。

6、应选用AR级以上的二甲苯以避免不纯的二甲苯导致的黑色沉淀。

7、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

8、本产品仅供科研使用，严禁它用。