钙离子荧光探针Fluo-8FF, AM

实验方案

储备溶液配制

所有未使用的储备液需分装为单次用量，于-20°C避光保存，避免反复冻融

Fluo-8FF® AM 储备液

用高质量无水 DMSO 制备 2 - 5 mM Fluo-8FF® AM 储备溶液。

工作溶液配制

Fluo-8FF® AM 工作溶液

在实验当天，将Fluo-8FF AM溶解在DMSO中，或将储备溶液的等分试样解冻至室温。，用含0.04% Pluronic® F-127的缓冲液（如Hanks-Hepes）稀释至2-20 μM。大多数细胞系，建议使用终浓度为 4-5 μM 的 Fluo-8L® AM。必须需根据细胞类型调整浓度

注意： 1.Pluronic® F-127 可增强 Fluo-8FF® AM 的水溶性。可以从百萤进行购买。

            2.若细胞存在有机阴离子转运体，建议在工作液中添加1-2 mM丙磺舒（孔内终浓度0.5-1 mM）以防止水解产物外排。多种形式的丙磺舒产品，包括水溶性、钠盐和稳定溶液，可从百萤购买。

操作步骤

以下是推荐的将AM酯加载到活细胞中的方案。本方案仅提供指南，实际应根据您的具体需求进行修改。

1.在生长培养基中制备细胞过夜。

2.第二天，将 1X Fluo-8FF® AM 工作溶液添加到孔板中。

注意：如果您的化合物会干扰血清，请在加载染料之前用新鲜的 HHBS 缓冲液替换生长培养基。

3.将加入染料的孔板在37°C的细胞培养箱中培养30至60分钟。

注意 将染料孵育 2 小时以上可以提高某些细胞系的信号强度。

4.用 HHBS 或您选择的缓冲液（含有阴离子转运蛋白抑制剂，例如 1 mM 丙磺舒，如果适用）替换染料工作溶液，以去除多余的探针。

5.根据需要添加刺激物，同时使用配备有 FITC 滤光片组的荧光显微镜或 FDSS、FLIPR 或 FlexStation的荧光板读取器在 490/525 nm 截止波长 515 nm 处检测荧光。